碱性磷酸酶缓冲液，阿拉丁

Western 实验步骤

。 2） 取出洗过的印迹膜，放入封闭缓冲液中（5% 的脱脂奶粉或 5% 的 BSA），摇床摇动，室温封闭 1.5-2 小时。 抗体的孵育 主要采用间接法，即先加入未标记的特异性一抗，抗体与膜上的抗原蛋白结合，再加入酶标（过氧化物酶或碱性磷酸酶）二抗进行检测。 1） 向封闭后的印迹膜中加入稀释过的特异性一抗，4 ℃ 孵育过夜。 2） 洗涤缓冲液洗膜 10 分钟 ×3 次。 3） 加入稀释后酶标二抗，室温孵育1小时，洗膜 3-6 次，每次 10 分钟。 检测 根据标记二抗的标记物的不同，其结果检测

免疫印迹（Western Blotting）实验

的缓冲液中），但不同的抗原-抗体反应，封闭条件均不相同，没有适合所有系统的封闭液，具体封闭条件（包括封闭液浓度、缓冲液种类、封闭时间、温度等）需自行优化。 注意事项 a. 影响非特异性结合的因素很多，针对不同的免疫原，其封闭条件均可进行优化，没有通用的封闭液，因为每个抗原-抗体反应都具有独特的性质； b. 在选择封闭物时，最重要的标准是信噪比，封闭条件不足，会导致过多的背景噪音，封闭条件过度，会造成信号变弱； c. 可根据不同的检测系统（碱性磷酸酶或辣根

TUNEL 检测细胞凋亡原则及经验总结

一、TUNEL法的实验原理 细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖