DMT-dG(Ib)亚磷酰胺，93183-15-4，≥99%

引物设计常见问题与解答(一)

是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3‘端向5’端合成的，相邻的核苷酸通过3‘→5’磷酸二酯键连接。第一步是将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5'-羟基的保护基团DMT,获得游离的5'-羟基；第二步，合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3‘端被活化，5'-羟基仍然被DMT保护，与溶液中游离的5'-羟基发生缩合反应。第三步，带帽（capping）反应，缩合反应中可能有极少

师弟问了我 25 个引物相关的问题

1.      引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。 DNA 合成仪有很多种 , 主要都是由 ABI/PE 公司生产，而 Bioneer自行研制 的专利 384并行高通量 DNA合成仪， 可实现 99% 的高合成率。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成 DNA 片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将 DNA 固定在固相载体上完成

Synthesis of Triazole‐Nucleoside Phosphoramidites and Their Use in Solid‐Phase Oligonucleotide Synthesis

Uracil (1 ), ≥99% pure Bromoacetic acid, 97% pure Methanol (MeOH), ACS grade