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Cytiva
第一链 cDNA 合成试剂盒设计用于在上游 mRNA 提取、分离或纯化后,从 mRNA 模板生成全长第一链 cDNA。
- 用于 PCR 扩增前单链 cDNA 合成
- 预组装大体积反应混合物可节省时间并最大限度地降低因移液而造成的误差
- 允许用户自行选择引物
- 两种引物可供选择:pd(N)6 随机六聚体和 NotI-(dT)18
cDNA 合成试剂盒
在第一链 cDNA 合成后,样品可直接用于体外扩增(使用 PCR)或第二链合成(使用 Gubler-Hoffman 方法)。
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文献和实验M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册一、 试剂盒组成 Components SK2027 SK2028 5×M-MLV Reaction Buffer 100µl
过的 DNA 聚合酶增强了与模板的亲和度,其灵敏度更高,因而所需的模板量少。过低的模板量会减少 PCR 的产量,过高的模板量可能造成非特异性扩增,所以 DNA 模板量的优化尤为重要。 除了 gDNA、cDNA 和质粒 DNA,PCR 产物也可作为模板以获得更高的产量。但 PCR 产物中存在的残余反应组分(如引物、dNTP、盐和副产物)可能会影响下一次的 PCR 反应。所以推荐在下一次 PCR 前使用 PCR 产物纯化试剂盒将 PCR 产物先进行纯化。 【DNA 聚合酶】 DNA 聚合酶是PCR扩增中最关键
样(比如 GeneArt EX 超长版就建议用 DH10B 电转感受态细胞)。市面上有多种为满足不同需求而优化条件的商品化组装克隆试剂盒,可以根据自己的需求选出最合适自己需要的——选对合适的 Kit ,每天都是好心情,实验高歌猛进充满成就感;选不合适就只能天天 re-search 了——反反复复来来回回(re-)地摸索(search)尝试,挺折磨的。选择kit时一般留意几个参数:插入片段长度,单次反应可插入片段数量,同源序列长度——即合成引物时要求添加的载体同源序列长度,反应时间,当然还有克隆效率(几个领先品牌的产品
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