细胞侵袭

一、实验前准备

材料与试剂

Transwell小室（孔径8 μm，聚碳酸酯膜）310

Matrigel基质胶（需提前4℃解冻过夜）1011

无血清培养基、含10% FBS的培养基、PBS、结晶紫染色液、4%多聚jia醛或甲醇510

细胞（需提前饥饿处理18-24小时，使用无血清培养基）59

设备

显微镜、24孔培养板、移液器、棉签、镊子等910

二、实验流程

Matrigel包被Transwell膜

用预冷的无血清培养基或PBS稀释Matrigel（稀释比例1:5~1:8，需预实验优化）310

取50-100 μL稀释后的Matrigel均匀铺于Transwell膜上表面（冰上操作），37℃孵育1小时使其凝固510

细胞悬液制备

消化对数生长期的细胞，用无血清培养基重悬，调整密度至1×10⁵~5×10⁵ cells/mL（需预实验确定最佳密度）5610

组装Transwell系统

下室（24孔板）加入600 μL含10% FBS的培养基（或趋化因子）作为诱导剂910

将Transwell小室插入孔板，上室加入100-200 μL细胞悬液，避免产生气泡310

细胞培养与侵袭

37℃、5% CO₂培养箱中孵育24-48小时（时间根据细胞侵袭能力调整）510

固定与染色

取出小室，用棉签擦去膜上表面未侵袭的细胞910

4%多聚jia醛固定20分钟，0.1%结晶紫染色15-20分钟，PBS清洗后风干510

结果观察与统计

显微镜下随机选取5个视野，计数膜下表面的侵袭细胞19

可选：用33%醋酸溶解结晶紫，570 nm测OD值定量5

三、关键注意事项

基质胶浓度与厚度

浓度过高会抑制侵袭，需根据细胞类型优化（如肿瘤细胞常用1:8稀释）610

细胞密度与活性

密度过高易导致细胞堆积，过低则数据不显著；建议饥饿处理减少增殖干扰56

对照组设置

需设置空白对照（无Matrigel）和阳性/阴性对照（如使用侵袭抑制剂）27

避免操作误差

铺胶时避免戳破滤膜，培养时防止气泡影响趋化梯度1011