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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
上海信帆生物
- 检测范围:
见说明书
- 检测方法:
ELISA
- 适应物种:
人
- 样本:
血清,组织,细胞
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(800U/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
400U/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
200U/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
100U/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
50U/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
25U/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,
然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
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文献和实验)、DNA和少量RNA组成。组蛋白有H1、H2A、H2B、H3、H4五种。DNA包装时,由各两个H2A、H2B、H3、H4组成一个八聚体核小体,每个八聚体可缠绕146 bpDNA(称为核心DNA)。H1联系相邻的核小体,有利于DNA更高级的包装。重复的核小体结构加上连接DNA,通过组蛋白及其他非组蛋白进一步地折叠、压缩,形成高度有序的染色质结构。 在细胞生命活动的选择性基因沉默或基因表达过程中,包裹于染色质中的基因组DNA序列一般不发生改变,但细胞核内的染色质结构可以发生高度动态变化,使一些特定
染色质的基本结构单位,为核蛋白的结构体。亦称 v体( v body)。核小体为由组蛋白 H2A、 H2B、 H3及 H4各 2分子所形成的组蛋白 8聚体( histone octamer),即在组蛋白核心( histoncore)的周围绕以 DNA。用某种核酸酶处理可分成核小体核心粒子( nucleosome core particle)和具有核粒子间连接作用的连接 DNA( Linker DNA)二部分。核心粒子是由组蛋白核心和绕在周围的有 146个核苷酸对的 DNA所构成
近年来关于组蛋白的研究越来越多,组蛋白各种各样的修饰有各种各样的功能,想要做跟组蛋白相关的研究,组蛋白提取是一个必不可少的技能了。你还在为组蛋白如何简单方便的提取而烦恼么,来,让学霸君教你一招。组蛋白有四种类型:H2A、H2B、H3、H4,组蛋白是染色体基本结构蛋白,因富含碱性氨基酸 Arg 和 Lys 而呈碱性,可与酸性的 DNA 紧密结合。因为组蛋白是偏碱性的,因此我们可以使用酸法来提取。下面学霸君就仔细介绍一下实验操作步骤啦:1、将 3-5×105 个细胞种到 6 孔板中,接着进行
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