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文献和实验验意义上进行分析: 印象中TLR4是机体对细菌的特异性识别受体,主要是LPS,脂多糖,鞭毛之类的应答。如果你没有做什么处理,那正常细胞的TLR4的表达量就应该很低的,建议用real time PCR来做,如果真的很低么,也没办法,就是P不出来了。 建议拿一个TLR4阳性样品做阳性对照,确认你的引物和体系没问题。 叮当儿 我的引物是没问题的,而且在过表达的细胞中提出RNA后再做PCR时工作的很好。RNA使用试剂盒提的,纯度也还可以。按照这个PCR
Single Primer ("Semi-Random") P
a biased ratio of Po and Pn. Make 3 reactions with varying [Mg++]: 15 µL H2O 3 µL 10x H, M or L-PCRB 3 µL 4 dNTPs @ 2 mM each 3 µL Po @ 5 µM 3 µL template diluted to about 1 ng/µL 3 µL "T/TS" @ 0.4 u Taq/µL -------- 30 µL
and structural analysis of 14-3-3 proteins.Jones DH; Martin H; Madrazo J; Robinson KA; Nielsen P; Roseboom PH; Patel Y; Howell SA; Aitken A Laboratory of Protein Structure, National Institute for Medical Research, London, U.K. J Mol Biol 245: 375-84
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