当归油（CAS：8015-64-3）

基于病毒载体的不同基因调控方式的原理和选择

性激活/抑制：通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点，Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白，dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上，在此基础上，研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件，如转录激活的VP64、VP16等，转录抑制的KRAB等，同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游，即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。dCas9技术原理3.外源过表达和内源激活的区别和选择4.基因干扰和基因敲除的的区别和选择

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

editing. Nat Biotechnol 30(5):460–465. doi: 10.1038/ nbt.2170 12. Deveau H, Garneau JE, Moineau S (2010) CRISPR/Cas system and its role in phagebacteriainteractions. Annu Rev Microbiol64:475–493. doi: 10.1146/annurev. micro.112408.134123 13

CRISPR/Ca9 应用及前沿研究

)，进而造成基因的移码突变而达到基因敲除的目的。此外，还可以通过同源重组等方式达到对基因精确编辑的目的。事实上，在此之前已经发展了多种基因编辑工具，如：ZFN，TALEN 等，但实际应用不方便或成本过高。CRISPR/Cas9 系统则相对较为简单，廉价，高效，而且可以多处打靶。此外，在内切酶活性失活的 Cas9 蛋白后加入 KRAB/VP64 等 effector 形成融合蛋白，可对下游基因进行调控。怎么用？如果是对于细胞的编辑可通过导入编码 guide RNA 和 Cas 9 的质粒；若是做动物