抗生素检定培养基8号（CAS：NULL）

CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计

来看一下。提交订单，等待引物到达：华大基因的速度非常快，大约在 2 - 3 个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好：LB + 抗生素抗性平板；感受态细胞及相应培养基；无内毒素的 Cas9 载体质粒；BbsI 限制性内切酶；质粒小提试剂盒；常规限制性内切酶。

抗生素检定用芽孢悬液的制备及注意事项

体积的 1%（有资料说不大于 2%）。如果加入菌悬液的体积过小，则在同次实验中，不同次加入菌悬液的体积相差较大， 造成实验误差；如果加入菌悬液的体积过大，则会使上层培养基变稀，并且因菌悬液的温度较低，加至培养基中可能造成培养基结块，影响测定结果。对于加入菌悬液体积的控制，可通过调节菌悬液的浓度来实现。下面为在海博生物技术公司生产的抗生素检定Ⅳ号琼脂上，莫能菌素对短小芽孢菌的抑菌效果：图 a 连续培养 7 天的短小芽孢菌图 b 莫能菌素对短小芽孢菌的抑菌效果从照片可以看出，菌悬液中芽孢率符合要求（≥ 85

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

pLV-Cas9Nick-Neo 我们现提供 4 种表达 Cas9 蛋白的慢病毒载体，您可以根据抗生素要求和基因敲除实验设计进行选择。 1）抗生素选择：Puromycin 或 G418 用嘌呤霉素筛选比较快，仅需 4-7 天即筛选出阳性细胞。G418 筛选需要 7-14 天左右。此外不同的细胞对抗生素的敏感度差别很大。最好在开始实验前对细胞进行抗生素敏感度测试，以选择合适的抗生素种类，确定筛选浓度。 2）Cas9 蛋白选择：Cas9 和 Cas