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安捷伦
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文献和实验For 10ml Elution-Buffer 50 mM Tris (pH 7.5) 500μL 1M 10 mM EDTA 200μL 0.5M 1% SDS 1mL 10% ddH2 O 8.3mL For labeling
以非那西丁为探针采用高效液相色谱法快速测定细胞色素P450 1A2的酶活性
【摘要】 目的建立一种快速、高效的以非那西丁作为探针药物评价细胞色素P450 1A2(CYP1A2)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(50 mm×4.6 mm I.D.,5 μm);流动相为乙腈-水(含0.01%七氟丁酸),梯度洗脱,流速2.0 ml・min-1;检测波长为244 nm。非那西丁与人CYP1A2酶在37 ℃温孵适当时间后,加入50 μl乙腈终止反应,10 000 g离心后取上清液进样分析测定。结果对乙酰
二氢钠(分析纯,重庆北碚化学试剂厂)、乙腈(色谱纯,山东禹王实业有限公司化工分公司)、水(二次蒸馏水)、氢氯噻嗪对照品(中国药品生物制品检定所,批号为100309�200702,含量99.8%)。 2 方法与结果 2.1 测定波长选择 取氢氯噻嗪对照品20 mg,置50 mL量瓶中,用甲醇�乙腈(1∶1)5 mL溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取此溶液5 mL置50 mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,在200~400 nm波长处扫描,扫描结果见图1。由图
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