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文献和实验): 蛋白分子量:16 KDa WB用膜类型、孔径:0.2 um PVDF膜 转膜方式(恒压、恒流):0.2 A恒流 转膜时间:65 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad 蛋白来源:成纤维细胞 蛋白名称(可保密): 蛋白分子量:28 KDa WB用膜类型、孔径:0.2 umPVDF膜 转膜方式(恒压、恒流):0.25 A恒流 转膜时间:60 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad
对么?对于小分子量的靶标蛋白(比如 cleaved caspase-3),避免过转非常重要。我们推荐的转膜条件如下:0.2 μm 孔径膜,湿转,70V(200-250 mA)不超过 1.5 小时。转膜液 25 mM Tris,192 mM Glycine,和 20% methanol。0.2 μm 的孔径能最大程度的减少转膜过程中小分子量蛋白的丢失。另外,也有文献表示,使用戊二醛固定 NC 膜 30 min,能稳定 caspase-3 与 NC 膜的结合,从而促进 caspase-3 的检测[7]
一、材料与试剂 1. 20%多聚甲醛 2. Na2EGTA 3. 三盐酸亚精胺 4. 亚精胺 5. 1,4-哌嗪二乙烷磺酸钠pH7.4 6. β-巯基乙醇 7. 油红 8. 异丙醇 9. 二硫苏糖醇 10. 0.2 μM 过滤器 11. Tris碱 12. 盐酸 13. PBS 14. 琼脂糖 15. 氯化钠 16. 氯化钾 17. Na2HPO4·7H2O 18. KH2PO
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