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文献和实验公司);T�18basic均质器(德国IKA公司);低速离心机(德国Sigma公司);旋转蒸发仪(德国Heidolph公司);DC�12氮吹仪(上海安谱公司);标准品(德国DR公司);PSA粉末、LC�Si固相萃取小柱500 mg/6 mL(美国Supelco公司);所用试剂均为分析纯或色谱纯;实验用水为三重过滤去离子水。 2.2 实验方法 2.2.1 样品提取 (1)新鲜样品 称取匀浆样品2 g至50 mL离心管中,加入乙酸乙酯20 mL,无水Na2SO4 8 g,用均质
胶? 亲和的填料合成过20来种,你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗,我看FMN可偶联的有限,倒是FAD有活泼的氨基好偶联,何况它们几乎是同一个辅酶,你是不是考虑把FAD连上去.当然FMN的结构上也有个仲胺,可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上,而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好,因此我觉得这个没有什么问题. 此外如果是以FMN为辅酶的,那我还可以建议 你试试蓝色琼脂糖凝胶,因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似,它能纯化不少脱氢酶和激酶.如果它可以你就不需要合成填料了,有现成的. 我已经给你发
有沉淀那你可以稍微把蛋白的浓度降低点,这也是个办法。2)请问楼主有没有合成过配体为FMN的亲和胶?亲和的填料合成过20来种,你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗,我看FMN可偶联的有限,倒是FAD有活泼的氨基好偶联,何况它们几乎是同一个辅酶,你是不是考虑把FAD连上去。当然FMN的结构上也有个仲胺,可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上,而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好,因此我觉得这个没有什么问题。此外如果是以FMN为辅酶的,那我还可以建议 你试试蓝色琼脂糖凝胶,因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似
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