500 292赛默飞CLSR 8-425 开口 聚丙烯

水稻叶片和根蛋白质的纳升级二维液相色谱串联质谱

1. 前言 应用于复杂的肽复合物分离和鉴定的纳升级 2D 液相色谱串联质谱（LC-MS/MS ) 技术的发展，是近年来蛋白质组学领域最重要的进展之一 [ 1，2] ，这种技术通常被称为多维肽段鉴定技术（Mudpit) [3] 。该方法首先将复杂的蛋白混合物用一种蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成一组大小不一的肽段混合物，然后用相互垂直的二维液相色谱分离这个肽段混合物，用这种二维液相色谱技术分离肽混合物不是各相液相色谱分离组分的简单算术总和，而是根据肽在各相液相色谱中的迁移特性，最终获得分离的肽

【共享】 蛋白质含量测定法/蛋白质沉淀法/Western免疫印迹

需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4•5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。2. 器材：可见光分光

分子生物学常用实验技术（page 3)

P]-dNTP 的存在下,由Klenow 片段作用合成放射标记探针，反应完毕后得到部分双链分子。在克隆序列内或下游用限制性内切酶切割这些长短不一的产物,然后通过变性凝胶电泳(如变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)将探针与模板分离开。双链RF 型M13 DNA 也可用于单链DNA 的制备,选用适当的引物即可制备正链或负链单链探针。 材料：已制备好的单链DNA 模板（方法参见第十章中有关内容）。 设备：高速台式离心机，恒温水浴锅等。 试剂： (1)10×Klenow 缓冲液：0.5mol/L NaCl