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文献和实验PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
重要。为了确保准确进行 DNA 拷贝,请确保选择高保真 DNA 聚合酶。高保真 PCR 酶具有 3'-5’ 核酸外切酶校对活性。当结合错误匹配的碱基对时,DNA 聚合酶停顿,导致合成暂延。合成暂延 允许去除错误匹配的核苷酸并使用正确的核苷酸取代。 保持序列准确的 DNA 聚合酶的绝佳选择是 Invitrogen SuperFi 或 Thermo Scientific Phusion 高保真DNA聚合酶。这两种酶具有高保真度,准确度是 Taq DNA 聚合酶的 300 倍或 52 倍,并且具有很高的产率。 Q
2. 次优样品分离。(A) 负载影响条带分辨率。 (B) 上样量过低会导致条带扭曲。 在上样缓冲液中准备好样品和分子量标准,其最终的体积通常占胶孔体积的 30%。由于孔底分布不均匀(图 2B),使用较少的上样体积会导致条带扭曲。对于含有 DNA 结合蛋白或粘性末端的样品,凝胶上样之前,混合物需加入至 含有 SDS 的上样染料中一同加热,因为蛋白质结合以及 DNA 片段之间的相互作用会导致分离效果不佳。 c .上样染料和缓冲液选择 制备凝胶电泳时,样品中添加了凝胶上样缓冲液 (通常是 6X 或 10
Noninvasive Human Nuclear Transfer with Embryonic Stem Cells
Electro-cell manipulator (ECM 2001) (BTX) Fusion chamber with 3.2-mm gap (BTX) Incubator (humidified, 37°C, 5% CO2 ) Incubator (humidified, 37°C, 6% CO2 , 5% O2 , and 89% N2 ) Micromanipulators (Eppendorf) Microscope
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