胃腺癌及胃组织组合芯片

胃腺癌及胃组织组合芯片，包含35例腺癌，5例胃组织，一例两点

一、组织芯片简介
组织芯片是一种新型的高通量、多样本的研究工具。它将数十个甚至几百个不同个体的组织标本集成在一张固相载体上，为医学分子生物学提供了一种高通量、大样本以及快速的分子水平的分析工具。
研究者一次可有效利用成百上千份自然或出于疾病状态下的组织标本来研究特定体的组织标本集成在一张固相载体上，为医学分子生物学提供了一种高通量、大样本以疗靶点的定位，抗体和药物的筛选等方面均有十分重要的实用价值。

二、组织芯片优势

三、组织芯片的制备流程

1、病理标本行切片、HE 染色、病理复诊，并标记实验所需组织的范围;按照实验目的设计组织芯片阵列的组织类型和排列方式；
2、按照实验目的设计组织芯片阵列的组织类型和排列方式；
3、根据复诊标记及阵列设计选择对应的组织病例编号；
4、按照组织病例编号从组织库中取出组织蜡块和对应的 HE 染色切片；
5、制备合适的空白受体蜡块；
6、按照阵列设计利用组织阵列仪抽提病理蜡块组织芯并有规律的排列在空白受体蜡块上，制备组织阵列块；
7、组织阵列块在 52℃ 恒温烤箱中加热融合，使组织芯与受体蜡块紧密融合；
8、全自动组织切片机以 20μm/转的进刀速度对组织阵列块修整蜡块，直至 80% 的组织芯完全曝露；
9、全自动组织切片机以 4"m/转的进刀速度对组织阵列块切片，切片裱附在防脱处理的载玻片上；
10、组织芯片沥干水分后，置于 60℃ 恒温烤箱中烤片 16 个小时；
11、组织芯片按编号每隔 20 张抽取一张作 HE 染色；
12、病理医生对抽检组织芯片中每一个组织样本进行复诊质检，结果由信息部输入组织芯片数据库；
13、组织芯片白片敷蜡后，置于冰箱 4℃ 冷藏室保存。

四、组织芯片使用指南

1、产品规格

暇步康生物	产品标准
组织芯片正式片	标配1张
组织芯片预实验片	标配1张

2、使用前准备
使用前将组织芯片垂直放于玻片盒内，60℃ 左右烘烤 2~3 小时将表面封蜡融掉。(可根据实际情况延长融蜡时间)
3、组织芯片应用
3.1.免疫组化染色实验步骤
3.1.1脱蜡和水化

Note!脱蜡前将组织芯片放在 60℃ 恒温箱中烘烤 2~3 小时
1）置于二甲苯 Ⅰ 中浸泡 10 分钟，在二甲苯 Ⅱ 中浸泡 10 分钟，在二甲苯 Ⅲ 中浸泡 10 分钟，在二甲苯 Ⅳ 中浸泡 10 分钟；
2）无水乙醇Ⅰ中浸泡5分钟在无水乙醇Ⅱ中再浸泡5分钟；
3）95%乙醇中浸泡5分钟；
4）85%乙醇中浸泡5分钟；
5）70%乙醇中浸泡5分钟；
6）蒸馏水中浸泡5分钟；

3.1.2 抗原修复(用于石蜡包埋组织芯片)

抗原热修复

A、高温高压热修复
取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH6.0于压力锅中大火加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖上锅盖扣上压力阀继续加热至喷气，从喷气开始计时1-2分钟后压力锅离开热源，冷却至室温取出玻片，先用蒸馏水洗两次后，用PBS洗5分钟。

B、微波热修复
取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH60于微波盒中微波加热至沸腾，将脱水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖上锅盖扣上理10-15分钟，取出微波盒冷却至室温，取出玻片先用蒸馏水洗两次，后用PBS洗5分钟。

酶消化方法
常用0.1%6胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶使用前酶预热至37C.切片也预热至37C消化时间为10-30分钟

3.1.3 免疫组化(IHC)染色

1）封蜡融掉；
2）PBS洗3次，各6分钟；
3）封蜡融掉；
4）用蒸馏水配置新鲜的 3%H2O2-甲醇室温封闭10分钟；
5）PBS洗3次，各6分钟；
6）滴加正常山羊血清封闭液室温20分钟；
7）甩去多余液体滴加一抗4C过夜；
8）37C°复温45分钟；
9）PBS洗3次，各8分钟；
10）滴加二抗，室温30分钟；
11）PBS洗3次，各8分钟；
12）DAB显色 10分钟在显微镜下掌握染色程度；
13）蒸馏水洗终止染色；
14）苏木素复染，盐酸酒精分化；
15）脱水透明封片镜检；

Note!上述冲洗步骤切勿直接对着组织冲洗，冲洗时力度要适中，以免组织芯片掉片。