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文献和实验肝癌( hepatocellular Carcinoma,HCC)是死亡率仅次于胃癌、食道癌的世界第三大常见恶性肿瘤。目前常用的肝癌诊断方法有影像学和生物标志物法,但是这些诊断方法的灵敏性和准确率都不够,以至于只有约30%的肝癌能被早期诊断出来。寻找灵敏高效的肝癌早期诊断方法对于肝癌的治疗有重大意义。 microRNA在1993年首次被发现。许多研究表明,在肝癌和癌旁正常组织之间存在microRNA表达谱的差异。另外,研究发现在人类血清血浆中存在大量稳定的microRNA
有效的手段。利用基因芯片技术首先可以了解正常组织和疾病组织基因表达谱的差异,并与组织学与生物化学变化联系起来。因为基因表达的增加或降低可能就是病理生理学的原因或结果,引起疾病的多个基因产物可以作为药物作用的靶分子,通过使表达异常的基因恢复正常表达或使异常减轻,可以指导药物筛选。其次,通过分析用药前后机体的不同组织、器官基因表达谱的变化,可以找出靶基因以及受到靶基因调控的基因,并能研究是否影响其他基因的表达而带来毒副作用。如果用mRNA反转录构建cDNA表达文库,再得到肽库制作肽芯片,则可以从众多的药物
1. 微阵列构建 (1)基因组片段化:将雄性个体(雄性个体包括完整的染色体,即含有Y染色体)基因组DNA经MseI消化(MseI识别位点为TTAA,可以保证富含CpG的片段不被破坏)成约200 bp 的小片段,而CpG岛仍然保持相对完整。 (2)去除富含甲基化CpG的高度重复序列:如上所述,在正常组织或细胞中,5 mC 多发生在高度重复序列,使得这些重复序列得以稳定,从而保持异染色质结构。而位于启动子区的CpG大部分是非
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