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5ml
1. 产品描述:
信励致和®2×高保真PCR预混液包含Pfu DNA Polymerase、dNTP 以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,提高了检测通量和结果的重现性。体系中加入的保护剂使得Pfu DNA Polymerase经过反复冻融后仍可保持稳定的活性;体系中不包含电泳指示剂。通过改造,信励致和的Pfu DNA Polymerase在长片段扩增能力、扩增特异性以及扩增产量方面得到了大幅度提升。其错配率是普通Taq酶的1/83,用于细菌、真菌、植物组织、动物组织的直接PCR,扩增产物为平端。
2. 产品特点:
(1)本产品为高保真PCR扩增试剂,产品的反应灵敏度高,扩增的特异性好。
(2)本产品可进行长片段基因扩增,使用 λDNA、质粒等简单模板,可以有效扩增长达15 kb的片段;使用基因组DNA等复杂模板,可以扩增长达10 kb的片段。
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文献和实验PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
酶。 图 1.非特异性扩增(左图)与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增(右图)。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液,您只需添加模板和引物,然后,开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤,使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样(注意:确保染料与下游应用兼容)。直接
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料,用以校正仪器系统以外的物理误差,比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的,当用此类试剂的时候,应该将 ROX 参比
,扩增目标片段 扩增片段与线性化载体、组装预混酶混合反应 转化感受态细胞 · Step 1 · 如果载体上正好有合适插入目标片段的酶切位点,酶切载体使之线性化。为了降低单酶切载体不完全的几率,减少载体自连和提高筛选成功率,强烈建议双酶切——后面一个切点只要距离第一个切点 5 个碱基以上就行(主要是给两个酶留出结合空间)。如果没有合适的酶切位点,根据选定插入位点设计引物,用反向 PCR 来获得线性化载体。在多片段组装克隆的世界里,凡是酶切搞不定的,统统 PCR 引物设计搞定。简单粗暴有效。 ·
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