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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
:1. 胞吐作用(运输小泡通过与细胞质膜的融合将内容物释放到细胞外基质的过程,被称为顺行运输)2. 内吞作用(是质膜上的蛋白转入细胞内再循环或重新调整活性的过程,称为逆行运输)3. 转胞吞作用(是把蛋白从质膜的一个位点转移到另一个位点的过程)。胞吐作用是蛋白通过内质网,高尔基体将蛋白转移到质膜,细胞外间隙,或胞浆中的其他细胞器的过程。内吞作用是生物分子包括蛋白被带进细胞的过程,内吞作用调节质膜运输和受体蛋白的数量和分布。转胞吞作用是蛋白在质膜上进行再分配的过程。 研究膜蛋白转运最常用的方法是组份
和有机溶剂提取 .但是针对膜蛋白的提取与细胞质蛋白,核蛋白提取不同之处在于它是嵌在膜中的,水溶性不好,基本方法就是用不同的离心速度去掉胞质蛋白等,最后用去污剂把蛋白从膜中释放出来。膜蛋白分离纯化的重要步骤是选择适当的增溶用表面活性剂,一般常用的有胆酸盐, CHAPS( 一种离子去污剂), Emulgen 和 Lubrol 等表面活性剂。1 、分离膜蛋白的方法(原则性):1 ) 先分离膜,然后提取;如选用冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法使得细胞破碎,然后通过剃度离心
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