- ￥1000 - 5000
- 晶风生物
- 中国
- GF-C426
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
HCC38 BL
- 库存：
100
- 细胞类型：
细胞系
- 组织来源：
淋巴母细胞
- 物种来源：
人
- 细胞形态：
上皮，成纤维，淋巴样
- 运输方式：
冷藏运输
- 年限：
长期
- 生长状态：
贴壁，悬浮
- 规格：
25T
人淋巴母细胞（EBV 转化）(HCC38 BL)培养步骤
a1、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
a2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
B、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；
3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的晶风生物无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏：
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
人淋巴母细胞（EBV 转化）(HCC38 BL)事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
人淋巴母细胞（EBV 转化）(HCC38 BL)售后条款:
1)细胞出现问题,可重发的情况有哪些?判定标准是什么?
1. 细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;
2. 细胞污染问题,请在收到产品48小时内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;
3. 常温发货的细胞静置24小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后,绝大多数细胞未存活,(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封,出现污染,重发;
5. 活率问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,核实后予重发;
6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照,3天未告知的,视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的,并跟技术人员沟通的,由技术人员判定为我方责任的,重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。
2)细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?
1. 客户造成细胞污染,不重发;
2. 客户不正确操作致细胞状态不好,不重发;
3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;
4. 细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发;
5. 细胞培养时经其它处理的,不重发;
6. 细胞收到2天内,未告知,不重发;
7. 视具体情况而定。
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文献和实验后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 P38 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中小鼠 P38浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置
l、4ml肝素抗凝血于离心管中，加入2ml RPMI 1640。 2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。 3、1500rpm，15min，吸取白细胞层（第二层）于另一离心管中。 4、加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次。 5、将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液，混匀。 6、水浴摇床，40次/分，37℃，3hr。 7、1500rpm，15min。将细胞
淋巴母细胞转形 blastoid transformation
亦称淋巴细胞的母细胞化。小淋巴细胞一遇到致敏性抗原，体积便增大成为大淋巴细胞，胞质嗜碱性增强，有时产生液泡。核亦增大，同时变成不规则的圆形，染色质显示微细的网状构造，可见到多个核仁，进行分裂增殖。淋巴细胞的母细胞化，可认为是与细胞免疫有关联的现象，在非特异性体外培养也得知有引起母细胞化的物质，植物凝血素（PHA）通常作细胞分裂促进剂（ mitogen）使用，基于淋巴细胞的母细胞转化率，可应用于淋巴细胞免疫机能的测定。已知淋巴细胞对植物凝血素促母细胞化反应低落的疾病有：淋巴
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