Bacillus coagulans BC01凝结芽孢杆菌B

本产品仅供科研
更多产品详细信息可免费向客服索取
产品名称：Bacillus coagulans BC01凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒
保存条件：-20℃
保质期：12个月
包装规格及成分（具体信息详见说明书）：

Bacillus coagulans BC01凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒通用原则
1. 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近于探针；
2. 扩增子的长度应不超过400bp，理想的最好能在100－150bp内，扩增片断越短，有效的扩增反应就越容易获得，较短的扩增片断也容易保证分析的一致性；
3. 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，及在SG分析中非特异信号；
4. 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G（不能有4个连续的G）；
5. 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。
 探针设计指导
1. 在设计引物之前设计探针；
2. 探针的Tm值应在68－70℃之间，如果是目测探针，则要仔细审查GC富含区；
3. 探针的5’端要避免有鸟氨酸，5’G会有淬灭作用，即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在；
4. 选择C多于G的链作探针，G的含量多于C会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。
5. 探针应尽可能的短，不要超过30个bp。
6. 检测探针的DNA折叠和二级结构。
 引物设计指导
1. 引物的Tm值应在58－60℃之间，这非常重要，因为我们的试验一般都使用退火温度为60℃，在这个温度下，5’核酸外切酶的活性最高。
2. 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。
3. 将引物尽量接近于探针

基于PCR的中药分子鉴定方法是辨别中药真伪，保证药材质量，促进中药产业现代化的十分重要的手段。但由于日晒，高温烘烤等处理极大地破坏了中药材DNA的完整性；处理过程中多酚多糖及其氧化物也会与DNA发生复杂的化学反应，所以从中药材中提取可以用于 PCR 的 DNA 比从新鲜植物中提取要困难很多。为解决这一问题，公司在植物 DNAOUT 产品基础上开发了Bacillus coagulans BC01凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒。
其特点如下：
1. 适合于大多数药材。
2. 得到的 DNA 纯净，OD260/280 一般都在 1.6 以上，原液或 100 倍之内的稀释液一般都能直接作为 PCR 模板。
3. 操作简单，整个过程只需要三十分钟左右。
4. 试剂无毒无害，环保卫生。
Bacillus coagulans BC01凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒使用方法
1. 65℃预热溶液 A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取 0.75 mL 加入到 10-15mL的塑料离心管中并放置于 65℃待用。
2. 称取 20 mg 左右的中草药，先剪成或研磨成微小的碎片，然后转移到预热的溶液 A 中匀浆，匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。也可以液氮研磨后将中草药粉末加入到预热的溶液 A 中(建议不要在陶器或玻璃研钵中研磨，因为其主要成分二氧化硅会非特异地吸附 DNA，降低 DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。
3. 将匀浆液置于 65℃水浴保温 5 分钟，然后全部转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(此时匀浆液较为粘稠，可将枪头剪去一截后转移上清，植物碎片可倒入)。
4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(上清液的体积一般为 200-700 µL，如果体积超过 700 µL，多余部分可以不要)。有的上清液中会有少量细小块状物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
5. 在上清液中加入等体积的溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀（溶液将呈白色混浊状），然后置冰浴中 5 分钟。
6. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新离心管中。
7. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。
8. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，两相交界面将有白色膜状物。小心转移上清到新离心管中。
9. 重复氯仿抽提步骤一次，此步可以有效去除含色素物质。
10. 加入 0.6-1 倍体积的异丙醇(自备)，上下颠倒 30 秒混匀。
11. 12000-15000 g 离心 5 分钟，弃上清，管底将有微小 DNA 沉淀。
12. 沉淀用 75%乙醇清洗 2 次后，室温晾干。
13. 加入 50-100 µL 自备缓冲液(如 TE)溶解沉淀。DNA 即可用于电泳，酶切和PCR 等反应。如果需要测 OD，则必须乙醇沉淀去除降解的 RNA。注意:用本
产品提供的 RNase 处理 DNA 样品时,做好按《分子克隆手册》等参考书上的方法彻底去除其中的 DNase。 
Bacillus coagulans BC01凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒使用方法
1. 65℃预热溶液 A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取 0.75 mL 加入到 10-15mL的塑料离心管中并放置于 65℃待用。
2. 称取 20 mg 左右的中草药，先剪成或研磨成微小的碎片，然后转移到预热的溶液 A 中匀浆，匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。也可以液氮研磨后将中草药粉末加入到预热的溶液 A 中(建议不要在陶器或玻璃研钵中研磨，因为其主要成分二氧化硅会非特异地吸附 DNA，降低 DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。
3. 将匀浆液置于 65℃水浴保温 5 分钟，然后全部转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(此时匀浆液较为粘稠，可将枪头剪去一截后转移上清，植物碎片可倒入)。
4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(上清液的体积一般为 200-700 µL，如果体积超过 700 µL，多余部分可以不要)。有的上清液中会有少量细小块状物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
5. 在上清液中加入等体积的溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀（溶液将呈白色混浊状），然后置冰浴中 5 分钟。
6. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新离心管中。
7. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。
8. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，两相交界面将有白色膜状物。小心转移上清到新离心管中。
9. 重复氯仿抽提步骤一次，此步可以有效去除含色素物质。
10. 加入 0.6-1 倍体积的异丙醇(自备)，上下颠倒 30 秒混匀。
11. 12000-15000 g 离心 5 分钟，弃上清，管底将有微小 DNA 沉淀。
12. 沉淀用 75%乙醇清洗 2 次后，室温晾干。
13. 加入 50-100 µL 自备缓冲液(如 TE)溶解沉淀。DNA 即可用于电泳，酶切和PCR 等反应。如果需要测 OD，则必须乙醇沉淀去除降解的 RNA。注意:用本
产品提供的 RNase 处理 DNA 样品时,做好按《分子克隆手册》等参考书上的方法彻底去除其中的 DNase。 
Bacillus coagulans BC01凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒使用效果：