MAP激酶激活的死亡域蛋白(MADD)重组蛋白

利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化

，我们用已知的人工合成 MAP 作为阳性对照，分析研究拟南芥的不同 MAP 激酶 [23] 。 ( 4 ) 重组蛋白质除了含有各自的蛋白质的编码序列外，常常还包含由克隆载体所编码的 3' 或 5' 标记物。这些标记物的磷酸化可能会导致假阳性结果，因此在芯片实验之前要将其排除掉。用一些已知的不被认为是相应激酶底物，并且具有相同表达模式（相同标记物）的重组蛋白质，在溶液中进行活性激酶的检测实验可能是一种解决问题的办法。在这个检测实验中，这些所选择的蛋白质应该显示阴性

基因敲除结核杆菌助力研究细胞焦亡的信号通路

了一种诱导巨噬细胞焦亡的结核蛋白 EST12。EST12 结合巨噬细胞中活化的 C 激酶 1（RACK1）的受体，EST12-RACK1 复合体募集去泛素化酶 UCHL5 来促进 NLRP3 的 K48 连接去泛素化，随后导致 NLRP3–caspase-1/11–GSDMD–IL-1β免疫过程。EST12 晶体结构分析表明，氨基酸 Y80 是 RACK1 的关键结合位点。EST12 敲除菌株在体内或体外 MTB 感染中都显示出了高易感性。该研究首次证明了 RACK1 作为病原体的内源宿主感应蛋白

用于蛋白质表达和纯化的pET-32α（+）载体的构建

，或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α（+）载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统，可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价，快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大，因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中，我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α（+）载体的构建，蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应（PCR