X-射线修复交叉互补蛋白6(XRCC6)重组蛋白

过表达都是相似的，敲除的方法却很多

获得敲除转化子的概率。 2载体转化和表达比较关键，周期较长，对细胞感受态要求也较高。 3对于真核生物的同源重组基因敲除研究较少：真核生物转化不容易，表达周期长，基因调控复杂，敲除之后不一定出现特定表型。  另外， 也有一些   在同源重组基础上发展起来的新技术   1 Red同源重组系统   Red同源重组系统主要包含3种蛋白质分子，分别称为Exo、Beta和Gam，这三者是λ噬菌体中的高效重组蛋白

抗体选择

特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。 （1）蛋白特异性 针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

的表达系统会造成质粒的不稳定，细胞生长速度的下降和重组蛋白产量的降低[32，33]。Lanzer和Bujard曾对常用的lac启动子-操纵子系统进行了广泛的研究，证明操纵子放在启动子序列的不同位置会造成70倍差异的抑制。将17bp的操纵子置于-10和-35六聚体区之间所形成的抑制比将其放在-35区的上游或-10区的下游要高50-70倍[34]。 启动子的第三个特性是其简便和廉价的可诱导性。大量生产蛋白质最常用的启动子是热诱导（λPL）和化学诱导(trp)启动子。异丙基硫代-β-D-半乳糖