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现货
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联硕生物
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10ml
蛋白上样缓冲液主要由TRIS、SDS、溴酚蓝、还原剂等组成。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这使蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级结构和三级结构。还原剂可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异,最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝作为电泳指示剂,可大概指示电泳结束的时间。
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5×,含DTT)即SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×,with DTT),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。
本产品含少量DTT,但不含有毒物质β-巯基乙醇,使蛋白上样操作相对安全健康。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
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文献和实验2~4 h,使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连; 免疫沉淀反应后,在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3~4 次;最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液,沸水煮 5 分钟; SDS-PAGE,Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
与蛋白充分结合.其实加热不是问题的关键,比如上述的Reynolds等人制备SDS-protein样品的方法是用先用盐酸胍处理,以得到蛋白多肽的无规卷曲构象(random coil conformation)然后用含SDS与巯基乙醇的缓冲液进行透析,文中还指出,若是省去盐酸胍这一处理步骤,直接将蛋白用含SDS与巯基乙醇的缓冲液进行透析能得到一样的结合率(约1.4g/1g),同样在Reynolds的另一篇文献中(THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY,1970,245
电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次(对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤)。 加入预冷的 RIPA 液(含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂),RIPA 液的用量:按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注:悬浮细胞,收集
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