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- AMEKO
- 国产
- RC21250-250T
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
RT
- 库存：
现货
- 供应商：
联硕生物
- 规格：
250T
目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA法和Bradford法。
BCA法测蛋白的原理是在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。BCA 法与传统方法相比，操作更简单、试剂及其形成的颜色复合物更稳定、灵敏度更高。BCA法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于5%以内的去垢剂如SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween80、NP-40具有很好的兼容性，但易受螯合剂、还原剂等的影响，在测定蛋白浓度前应尽量使样本满足如下要求：EDTA浓度≤10mM、DTT浓度≤1mM、2-ME≤0.01%、无EGTA。
BCA Protein Assay Kit在50～2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定，其最小检出量为25μg/ml。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
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文献和实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。实验对象为细胞样品，每份样品取1×106~1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE）：将准备好的样品液和预染
目前常用比色法测定样品蛋白的含量：Bradford法（考马斯亮蓝法）、Lowry法（Folin-酚试剂法）、 BCA法等。但各有优缺点，大家可以根据具体情况选取。按相应蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大，大家可以根据具体情况选取。Bradford法（考马斯亮蓝法）:考马斯亮蓝G
)。 2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。 3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳 (SDS-PAGE)：将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。 4. 蛋白质转移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。 5. western blot 膜的封闭和抗体孵育 膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异
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