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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
快速高保真DNA聚合酶(野生型)
- 保质期:
3年
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件:
低温保存
- 规格:
500 U,2.5 U/ul
快速高保真DNA聚合酶(野生型)
产品特点
快速高保真 DNA 聚合酶(野生型)是从克隆有 Pfu DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的,该酶融合了 sso7d 序列,该酶在保证高保真性前提下,大大增强扩增的速度。
在 PCR 反应中,该酶延伸速度为 1 kb/10-15s,较适合小于2kb以下片段的扩增,具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 3’-5’外切核酸酶活性,产物3’端不带A,不能直接用 TA 载体克隆。一般用于 DNA 片段的 PCR 扩增、DNA 标记、引物延伸、序列测定等,产物不能直接用于 T/A 载体克隆。
成分规格
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产品组成 |
规格 |
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快速高保真 DNA 聚合酶(野生型) |
200μl / 500U/ 2.5U/μl |
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10×快速高保真 Buffer |
2×1ml |
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-20℃,有效期 1 年 | |
|
本产品仅供科研使用 ,不得用于其它用途 | |
使使用方法
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产品组成 |
规格 |
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快速高保真 DNA 聚合酶(野生型) |
200μl / 500U/ 2.5U/μl |
|
10×快速高保真 Buffer |
2×1ml |
|
-20℃,有效期 1 年 | |
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本产品仅供科研使用 ,不得用于其它用途 | |
注 意:以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、
引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)
1. PCR 体系:
推荐体系(50μl)
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试剂 |
用量 |
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模板 DNA |
< 1μg |
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10×快速高保真Buffer |
5μl |
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dNTP Mixture(2.5 mM each) |
4μl |
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Primer 1 (10 μM) |
2μl |
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Primer 2 (10 μM) |
2μl |
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快速高保真 DNA 聚合酶(野生型) |
0.5 ~ 1μl |
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ddH2O |
Up to 50μl |
2. PCR 程序
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过程 |
温度 |
时间 | |
|
预变性 |
94℃ |
5min | |
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25-35cycles |
变性 |
94℃ |
30sec |
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退火 |
55-65℃ |
30sec | |
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延伸 |
72℃ |
1kb/15sec | |
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终延伸 |
72℃ |
5min | |
注 意:
a. 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 相当,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
3. 结果检测:
反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。
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