CTAB法植物基因组DNA提取试剂盒

CTAB法植物基因组DNA提取试剂盒
产品及特点
本试剂盒适用于从多种植物的不同组织中快速提取高质量的基因组DNA，特别适用于多酚、多糖含量高的植物组织和植物干粉。吸附柱中独特的硅基质材料和相应的缓冲液能有效去除植物组织中的多糖、多酚复合物和酶抑制剂，基因组DNA在高盐状态下选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除其他杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱下来。使用本试剂盒提取的植物基因组 DNA，可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
它具有下列特点：
1. 简便快速：1 小时内可获得高纯度的基因组 DNA。
2. 纯度高：可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
3. 应用广泛，可应用于多种植物的多种组织，特别适合于多糖、多酚含量高的植物及干粉。
使用方法
（注 意：使用前在 BufferGP1 中加入β-巯基乙醇，使其终浓度为 0.2%，水浴锅中65°C预热）
1. 取植物新鲜组织约 100 mg 或干组织约 30 mg，加入液氮充分研磨。
（注 意：如果组织为较幼嫩部分，可不用液氮研磨，直接在研钵中加入700μl Buffer GP1 和组织一起研磨即可）
2. 将研磨后的粉末收集到一离心管（自备）中，加入700 ul 65℃预热的Buffer GP1（使用前在预热的 Buffer GP1 中加入β-巯基乙醇，使其终浓度为 0.2%），迅速颠倒混匀或用涡旋振荡器充分振荡混匀，然后将离心管置于65°C 水浴 20 min，期间每隔3 - 5 min颠倒离心管混匀样品一次。
（注 意：如要去除 RNA，可在上述步骤完成后加入浓度为 100mg/ml 的 RNaseA 4 μl，振荡混匀，室温处理 5-10min）
3. 加入 700 μl 氯仿，充分混匀，12,000 rpm 离心 5 min。
（注 意：如果提取的植物材料富含多酚或淀粉，可在第 3 步骤前用酚：氯仿/1：1 进行等体积抽提）
4. 小心将上层水相转入一新的离心管（自备）中，加入 700 μl Buffer GP2，充分混匀。将混匀后的溶液转入离心吸附柱中，若一次不能转移完成，可分次加入，12,000rpm离心 30 sec，弃收集管中废液。
5. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer W1，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中废液。
（注 意：Buffer W1 是浓缩液，按要求加入乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
6. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中废液。
（注 意：Buffer W2 是浓缩液，按要求加入乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
7. 重复步骤 7 一次。
8. 室温 12,000 rpm 离心 2 min，甩干吸附柱上的残留液体。
（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用）
9. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管（自备）中，加入50-100 μl Buffer EB，室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 2 min，离心管底溶液即基因组DNA。
（注 意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在 50-60°C 预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH 值在 7.0-8.5 之间，为了增加 DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2min，再次离心收集）