粪便基因组DNA提取试剂盒

粪便基因组DNA提取试剂盒
产品及特点
本试剂盒采用特殊的裂解条件释放粪便中的 DNA，此外，采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统进行粪便 DNA 提取，所提DNA 分子纯度高，可直接进行 PCR、Real-Time PCR，酶切和杂交等相关分子生物学实验，整个过程安全可靠、简单快速。
它具有下列特点：
1. 简便快捷：操作快速方便，1 小时内可获得高质量的基因组DNA；
2. 适用广泛：适用于不同来源的固态或液态粪便样本；
3. 稳定可靠：高效的沉淀剂去除腐殖酸等杂质，得率高，纯度好，重复性强。
使用方法
（注 意：使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签）
1. 取粪便 50-100mg 于 2 ml 无菌离心管中，加入 400 μl Buffer GTL，0.25g 研磨珠振荡至样本充分混匀。
（注 意：如果是较干燥的粪便则取 50 mg 即可，加入 400 μl Buffer GTL 在研钵中研磨成细糊状，或在组织研磨仪中加入一颗钢珠研磨成细糊状）
2. 加入 400μl Buffer GL，20μl 蛋白酶 K，充分混匀，70℃金属浴或水浴10 min期间震荡 2-3 次。
（注 意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可将温度提高到 95℃以促进裂解）
3. 室温 12,000 rpm 离心 2 min 沉淀粪便杂质颗粒。
4. 转移上清到一新的离心管中，加入100μl Buffer AB立即涡旋振荡1 min，室温放置2min，最高转速离心 3 min 再次沉淀杂质。
（注 意：大概可以取 500-600 μl 上清，不要取下面的沉淀）
5. 转移上清到一新的离心管中，注意不要吸到沉淀，加入1/3 体积的异丙醇立即混匀。
6. 将一吸附柱放入收集管中，将液体全部转入到吸附柱中，12000 rpm离心30 s，弃滤液。
7. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer IR，12000 rpm 离心 30 s，弃滤液。
8. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer W1，10000 rpm 离心 30 s，弃滤液。
（注 意：按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
9. 向吸附柱中加入 600 μl Buffer W2，10000 rpm 离心 30 s，弃滤液。
（注 意：按要求在 Buffer W2 中加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
10. 重复操作步骤 9 一次。
11. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，以去除吸附膜上的乙醇。
12. 将吸附柱转入一干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50 ~ 100 μl Buffer EB，室温放置 2 min，12000 rpm 离心 1 min，收集 DNA。
(注 意：为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再次加入吸附柱中，室温放置2 min，12000rpm 离心 1 min。洗脱液的 pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水作洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率)
注意事项
1. 样本应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段降解，降低提取效率；
2. 若 Buffer GTL、GL、W1 中有沉淀，可在 37℃水浴中溶解，摇匀后使用。