石蜡包埋组织基因组DNA提取试剂盒

石蜡包埋组织基因组DNA提取试剂盒
产品及特点
本试剂盒采用加热处理方式快速去除石蜡，同时应用特殊的裂解条件释放组织切片中的 DNA，此外，采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统进行石蜡切片 DNA 提取，所提 DNA 分子纯度高，可直接进行 PCR、Real-Time PCR，酶切和杂交等相关分子生物学实验，整个过程安全可靠、简单快速。
它具有下列特点：
1. 简便快捷：操作快速方便；
2. 操作安全：不需要二甲苯等有毒试剂；
3. 稳定可靠：得率高，纯度好，重复性强。
4. 提取得到的 DNA 产物可用于 PCR 和 real-time qPCR、SNP 基因分析和STR基因分析、药物基因组学研究等。
使用方法
自备试剂
无水乙醇、RNase A（可选）。
（注 意：使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签）
1. 取石蜡切片（5 - 10 um 厚，1×1 cm2大小）3 - 8 张于 1.5 ml 无菌离心管中，加入250ul Buffer GA，90℃金属浴或水浴30 min。
（注 意：若 buffer GA 出现沉淀，在温水中溶解后再使用；此步骤的目的是溶解并脱去切片中的石蜡，裂解组织细胞释放 DNA，并修复由甲醛变性的核酸，孵育时间过长和温度过高都会造成DNA的断裂）
2. 室温 10,000 rpm 离心 1 min，小心穿过石蜡层，吸取 200 ul 包含组织的液体到一新的离心管中。
（注 意：用 1ml 枪头吸取，剪去枪头尖端，否则组织吸不出来造成堵塞）
3. 加入蛋白酶 K 20 ul，混合均匀，56℃水浴。
（注 意：期间每隔 10 min 混匀一次，若 1h 后组织仍未消化完全，可继续消化甚至过夜，至组织完全消化为准）
4. 将消化后的样品 10000 rpm 离心 1 min，吸取上清到一新的1.5ml 离心管中，加入250ul Buffer GL 涡旋混匀。
5. 加入 250 ul 无水乙醇，涡旋震荡充分混匀，短暂离心收集管壁上的液体。
6. 将一吸附柱放入收集管中，将液体全部转入到吸附柱中，10000 rpm离心30 s，弃滤液。7. 向吸附柱中加入 500 ul Buffer W1，10000 rpm 离心 30 s，弃滤液。
（注 意：Buffer W1 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖以防酒精挥发8. 向吸附柱中加入 600 ul 漂洗液 Buffer W2，10000 rpm 离心30 s，弃滤液。
（注 意：Buffer W2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖以防酒精挥发）
9. 重复操作步骤 8 一次。
10. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，以去除吸附膜上的乙醇。
11. 将吸附柱转入一干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30 - 100 ul Buffer EB，室温放置 2 min，10000 rpm 离心 1 min，收集 DNA。
(注 意：洗脱液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再次加入吸附柱中，室温放置 2 min，10000 rpm 离心 1 min。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用水作洗脱液应保证其 pH 值在 7.0 - 8.5 范围内，pH 值低于7.0 会降低洗脱效率)
注意事项
1. 拿到样品后要尽快在 4 - 10%的福尔马林中固定，固定时间以8 - 24 h 内为宜，时间过长导致基因组断裂，影响下游实验；
2. 确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制 PCR 检测酶的作用；
3. 本产品适用于医学、科学实验研究；
4. 本产品所提 DNA 的完整性依赖于样本类型、储存时间以及固定条件，如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久（＞1 年）则易导致 DNA 完整性受损，无法扩出长片段；
5.若 Buffer GA、GL、W1 中有沉淀，可在 37℃水浴中溶解，摇匀后使用。