DNA产物纯化试剂盒

DNA产物纯化试剂盒
产品特点
本试剂盒用于直接纯化酶切及 PCR 产物。Buffer PB 溶液中含有pH指示剂，可根据颜色来判断酶切或 PCR 产物回收是否达到最佳状态。使用本产品可回收100 bp-8kb大小的 DNA 片段，回收率可达 80%，该试剂盒操作简便，得到的DNA 片段可用于酶切、连接、测序等实验。
它具有下列特点：
1. 快速：步骤少，操作简便，整个操作仅需十几分钟。
2. 高效：每个离心吸附柱可吸附 10 μg 以上的 DNA 片段，回收效率在80%以上。
使用方法
使用前请先在漂洗液 Buffer W2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 柱平衡：
向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 μl 平衡液BL，12,000rpm离心 1 min，弃收集管中的滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）2. 估计 PCR 反应液或酶切反应液的体积，向其中加入等体积溶液Buffer PB，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）。
（注 意：对于回收小于 150 bp 的小片段可将溶液 Buffer PB 的体积增加到3倍以提高回收率；溶液混匀后应呈现黄色。如果溶液的颜色为桔红色或紫色，请使用 10 μl 3M 乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。）
3. 将上一步所得溶液加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置2 min，12,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的滤液，将吸附柱放入收集管中。
（ 注 意：吸附柱容积为 750 μl，若样品体积大于 750 μl 可分批加入。）
4. 加入 500 μl Buffer W2，12,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。
（注 意：如果纯化的 DNA 是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议Buffer W2加入后静置 2-5 min 再离心，然后再清洗一次）
5. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留漂洗液。
（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续实验）
6. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 离心管中，在吸附柱中央加入20 - 50 μl 洗脱液，室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min 收集 DNA 片段。
（注 意：为增加回收效率，可将洗脱液在 60℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集。如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其pH 值在7.0 - 8.5 之间）
注意事项
1. Buffer BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
2. 使用前请先检查 Buffer BL、Buffer PB 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3. 溶液 Buffer PB 含有 pH 指示剂，黄色，pH≤7.5。
4. 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。