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文献和实验迁移实验需要制胶、跑胶、转膜、检测等步骤,操作稍显繁琐;特别是在样本量较大的时候,更显得力不从心。 为了解决这些转录因子检测中的问题,美国Signosis开发出了一种快速高效的半定量活性转录因子检测方法——滤板法。这种方法同样基于转录因子与特定DNA序列结合的原理,以标准96孔板为载体进行实验操作。针对不同的转录因子设计特异性的生物素标记DNA探针,探针与样本核提取物中相应的转录因子结合形成TF/DNA复合物。用滤板除去游离的DNA探针,随后从滤板上洗脱并收集TF/DNA复合物中的DNA探针。用标准
器。 1. 构造 ①赛氏(Seitz)滤菌器(图3-2):由三部分组成。上部的金属圆筒,用以盛装将要滤过的液体;下部的金属托盘及漏斗,用以接受滤出的液体;上下两部分中间放石棉滤板,滤板按孔径大小可分为三种:K滤孔最大,供澄清液体之用;EK滤孔较小,供滤过除菌;EK-S滤孔更小,可阻止一部分较大的病毒通过。滤板依靠侧面附带的紧固螺旋拧紧固定。 ②玻璃滤菌器(图3-3):由玻璃制成。滤板采用细玻璃砂在一定高温下加压制成。孔径由0.15~250 μm不等,分为G1
转录因子表达情况,操作过程跟ELISA实验差不多,结果数值化呈现,判读更直观、分析更简单。用这个做就更有针对性一点,只做常见的转录因子,后续的实验安排也更有针对性。 加“分”Step 3 ● 高通量筛查后,通常要对表达差异的转录因子进行验证。 ● 验证方法很多,包括转录因子滤板法、EMSA、ELISA以及荧光素酶报告载体等。 ● 特别推荐一种适用于大量样本检测的“转录因子滤板法检测试剂”,一次实验可以检测96个样本中的转录
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