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- abs580232
- 上海
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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现货
- 英文名：
Reactive Oxygen Species Assay Kit
- CAS号：
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- 保质期：
-20℃避光保存，有效期12个月
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃避光保存，有效期12个月
- 规格：
1000T
描述：
DCFH-DA（二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯）本身无荧光，可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的酯酶水解，形成 DCFH，DCFH 无荧光且不能通透细胞膜，从而被细胞内的活性氧氧化生成有荧光的 DCF。根据活细胞中荧光的产生，可以判断细胞活性氧的含量和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典的组织或活细胞中活性氧检测方法。Rosup 为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。
使用方法：
一、装载ROS探针：
1、原位装载探针(仅适用于贴壁细胞)
（1）细胞准备：检测前一天进行细胞铺板，确保检测时细胞数量小于5×105/mL。
（2）药物诱导：去除细胞培养液，加入无血清培养基稀释的药物处理，于37℃细胞培养箱内避光孵育，实际诱导时间由药物特性和细胞类型决定。
（3）（可选）阳性对照：先用无血清培养基等稀释阳性对照（Rosup, 100 mM）到常用工作浓度100 μM，加入细胞，37℃避光孵育30 min-4 h，以提高活性氧水平，不同细胞类型存在差异。例如：HeLa细胞需孵育30-60 min，MRC5人胚胎成纤维细胞则需孵育90 min。
（4）ROS探针准备：探针装载前按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使其终浓度为10 μM。
（5）ROS探针装载：吸除处理药物，加入适当体积稀释好的DCFH-DA工作液。加入的体积需充分盖住细胞。例如：6孔板通常不少于1 mL，对于96孔板通常不少于100 μL。37℃细胞培养箱内避光孵育30 min。
（6）细胞清洗：用无血清培养液洗涤细胞1-2次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
2、收集细胞后装载探针（适用于贴壁细胞和悬浮细胞）
（1）细胞准备：按照标准方法培养细胞，必须保证检测用细胞状态。按照适当方法，清洗并收集足量的细胞。
（2）药物诱导：将收集好的细胞悬浮于适量稀释好的药物，于37℃细胞培养箱内避光孵育，实际诱导时间由药物特性和细胞类型决定。
（3）（可选）阳性对照：先用无血清培养基稀释阳性对照（Rosup, 100 mM）到常用工作浓度100 μM，加入细胞，37℃避光孵育30 min-4 h以提高活性氧水平，不同细胞类型存在差异。例如：HeLa细胞需孵育30-60 min，MRC5人胚胎成纤维细胞则需孵育90 min。
（4） ROS探针准备：探针装载前，按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使其终浓度为10 μM。
（5） 探针装载：除去细胞内药物，离心收集细胞，加入稀释好的探针，使其细胞密度为1.0×106-2.0×107。注意：细胞密度需根据后续的检测体系，检测方法，以及检测总量来进行调整。例如：对于流式分析，单管检测内细胞数目不少于104，也不可多于106。
（6）细胞清洗：用无血清细胞培养液洗涤细胞1-2次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
二、荧光显微镜检测
1、对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取 25-50 μL 细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2、荧光显微镜下，选用 FITC 滤光片观察荧光，去除背景观察荧光的变化。
三、流式细胞仪分析
1、对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用 0.5-1 mL PBS 重悬细胞(0.5-1×105/mL)。
2、选择流式细胞仪 FL1 或BL1 通道，488 nm激发，测定 530 nm 的发射，细胞应可分成两个亚群：ROS阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的绿色荧光。
注意事项：
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文献和实验、加冰水等生物或者非生物刺激，均可以诱导细胞ROS的快速产生。 你这个作用强度不好控制。 baby1_9253344 ecust小熊 wrote: 你这个作用强度不好控制。 我外行了，是不是只要不适合细胞的生长环境都会刺激生成ROS？ ikewei ROS 即活性氧，具体的定义教科书上，网上大把，就不在说了。使细胞中的ROS升高的因素
大鼠 活性氧簇（ROS ）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中活性氧簇（ROS ）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠活性氧簇（ ROS ）水平。用纯化的大鼠活性氧簇（ ROS ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入活性氧簇（ ROS ）与 HRP 标记的活性氧簇（ ROS ）抗体
Nat Nanotechnol：T 细胞免疫活性的可视化调控研究进展
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