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Piscirickettsia salmonis鲑鱼立克次氏

体染料法荧光定量PCR试剂盒
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      上海圻明生物

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      50次

    Piscirickettsia salmonis鲑鱼立克次氏体染料法荧光定量PCR试剂盒上海圻明生物优势供应。更多产品资料欢迎免费咨询。

    One of the many important uses of PCR technology is that it can be used to label DNA probes with high specific activity. PCR technology has high specificity, and can synthesize probe DNA fragments in quantities within 1~2h if [α-32P]dNTP or other markers are added to the substrate
    dNTPs, the probe DNA can be well labeled during DNA synthesis, and the incorporation rate of the marker can be as high as 70%~80%. Therefore, PCR labeling technology is particularly suitable for large-scale detection and non-radiolabeling. The disadvantage of this method is that a specific pair of PCR primers is synthesized.
    Labeling can also be achieved by using small fragments prepared from probe DNA as primers.

    Solution preparation

    1. Prepare a stock solution

    Unless otherwise stated, all unused stock solutions should be divided into disposable aliquots and stored at -20 °C after preparation. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
    1.1* Acid Stock Solution (125X):
    Add 20 μL DMSO to *ate (component B) to make a 125X* acid stock solution. 

    2. Prepare standard solutions

    *Salt standard solution
    Add 50 μL of 1 mM KH2PO4 (Component C) to 950 μL of deionized water or enzyme reaction buffer to give a 50 μM * saline standard solution (PS7). A 50 μM * saline standard solution (PS7) was taken and serially diluted 1:2 to obtain a serially diluted phosphate standard with deionized water or enzyme reaction buffer.

    3. Prepare a working solution

    Add 20 μL of 125X* stock solution to 2.5 mL of sterile H2O and mix well to make a working solution of *salt. Avoid potential Pi contamination. Note: Avoid direct exposure of *salts (component B) to light. Due to the high sensitivity of this assay to Pi, it is extremely important to use Pi-free labware and reagents.

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    • qPCR常见问题及其分析

      浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的mix试剂盒。模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。5. 溶解曲线不止一个主峰引物设计不够优化:应避免引物二聚和发夹结构的出现。引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的 mix 试剂盒。模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异

    • 【分享】分享 QPCR 教程

      -150bp的产物长度。3. 标准曲线线性关系不佳 加样存在误差: 使得标准品不呈梯度。 标准品出现降解: 应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。 引物或探针不佳: 重新设计更好的引物和探针。 模板中存在抑制物,或模板浓度过高4. 负对照有信号 引物设计不够优化:应避免引物二聚和发夹结构的出现。 引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。 镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的mix试剂盒。 模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因

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      。 模板中存在抑制物,或模板浓度过高4. 负对照有信号 引物设计不够优化:应避免引物二聚和发夹结构的出现。 引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。 镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的mix试剂盒。 模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。5. 溶解曲线不止一个主峰 引物设计不够优化:应避免引物二聚和发夹结构的出现。 引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。 镁离子浓度过高:适当降低

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