- ￥9980
- 爱必信(absin)
- abs560003
- 上海
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Human KRAS WT&cRAF Binding Kit
- CAS号：
-
- 保质期：
-80°C保存，其中MRTX1133保存于-20°C，Detection buffer 保存于4°C；有效期1年。
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- 保存条件：
-80°C保存，其中MRTX1133保存于-20°C，Detection buffer 保存于4°C；有效期1年。
- 规格：
500T
| 概述 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 |
检测原理：
试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定KRAS WT/GTP/cRAF的相互作用，该方法是实现快速检测KRAS-cRAF相互作用小分子抑制剂的高通量筛选形式。 如图所示，KRAS WT/GTP/cRAF的相互作用是通过使用Eu标记的抗Tag1抗体（TR-FRET供体）和accepter标记的抗Tag2抗体（TR-FRET受体）检测的。由于KRAS WT/GTP/cRAF相互作用，供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与KRAS WT/GTP/cRAF的相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 产品组成 |
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| 使用方法 |
以384浅孔板为例
一、试剂配制 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20uL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。
1、Tag1-KRAS WT protein：取26uL Tag1-KRAS WT protein，用Detection buffer稀释至1040uL，混匀备用。 2、GTP：取10uL GTP，用Detection buffer稀释至1000uL，混匀。 3、Mix-1：Tag1-KRAS WT protein和GTP分别稀释后1:1混合，每孔用量4uL。 4、Tag2-cRAF protein：取26uL Tag2-cRAF protein，用Detection buffer稀释至2080uL，混匀备用，每孔用量4uL。 5、MRTX1133或待检测化合物：按照反应体系，化合物应用Detection buffer稀释至体系终浓度的10倍。例如体系终浓度为100nM, 应稀释浓度为1000nM。同时稀释相同百分含量的DMSO作为阴性对照孔，每孔用量2uL。 6、Anti-Tag1 Eu cryptate antibody：取25uL Anti-Tag1 Eu cryptate antibody，用Detection buffer稀释至2500uL，混匀。 7、Anti-Tag2 accepter antibody：取125uL Anti-Tag2 accepter antibody，用Detection buffer稀释至2500uL，混匀。 8、Mix-2：Anti-Tag1 Eu cryptate antibody和Anti-Tag2 accepter antibody分别稀释后1:1混合，每孔用量10uL。 二、加样及对照 1、实验孔加样顺序：4uL Mix-1，4uL Tag2-cRAF protein，2uL MRTX1133或待检测化合物，10uL混匀的 Mix-2，依次加入384浅孔板中。 2、DMSO对照孔（Blank）： MRTX1133或待检测化合物替换为2uL相同百分含量的DMSO溶液。 3、Buffer背景孔：10uL Detection buffer加10uL Mix-2。 三、检测 用封板膜封住板孔，室温孵育1h。在兼容TR-FRET的酶标仪上检测（激发光为320nm,检测620nm和665nm的发射波长）。 四、结果计算 1、TR-FRET Ratio计算 TR-FRET Ratio = 665nm / 620nm *10000 2、抑制率计算 Inhibition (%) =[1- (Ratio样品孔-Ratio buffer blank)/ (Ratio DMSO- Ratio buffer blank)] * 100% 3、计算CV（%） CV（%）= Standard Deviation/Mean Ratio×100% | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 性能 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 储存/保存方法 |
-80°C保存，其中MRTX1133保存于-20°C，Detection buffer 保存于4°C；有效期1年。
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技术资料Human KRAS WT&cRAF Binding Kit
￥9980
