EasySep™ Releas

在进行Treg分选时，通常以CD4和CD25作为标志物，其充分利用Treg上CD25的高表达来富集FOXP3+细胞。然而靶向CD25可能会干扰Treg中的IL-2信号传导，影响下游的功能实验。 为此，STEMCELL研发并推出了以CD304为靶向标志物的分选试剂盒EasySep™ Release小鼠CD4+CD304+调节性T细胞分选试剂盒（产品号 #100-1570），其可简单、快速地从小鼠脾细胞或淋巴结中分离出CD4+CD304+（胸腺来源或天然）调节性T细胞，并且还可从同一样本中分离出CD4+CD304-应答T细胞以进行功能分析（如Treg抑制分析）。 目前常用的Treg分选试剂盒首先需要对CD4+细胞进行负选、离心和重悬，然后再进行CD25正选从而获得CD4+CD25+细胞；而此EasySep™ Treg试剂盒首先通过正选CD304+细胞，然后在一个步骤中同时去除磁珠和非CD4+细胞，最终分选后的细胞中含有高表达FOXP3和CD25的CD4+CD304+细胞，并且不含磁珠，可立即用于下游应用，如流式细胞术、细胞培养或DNA/RNA提取等。 此外，该试剂盒以CD304为靶向标志物，而非CD25（IL2RA），因此不会干扰Treg中的IL-2信号传导，从而能够确保维持Treg的功能。

产品优势：

• 在45分钟内获得纯度高达94%的CD4+CD304+细胞；
• 获得无磁珠且具有功能性的CD25high Treg，且不会干扰IL-2信号传导；
• 使用EasySep™ Release RapidSpheres™可解离磁珠，无需耗时的清洗步骤；
• 可从同一供体中分离出CD4+CD304-应答T细胞。

产品数据：

 图1 使用EasySep™ Release小鼠CD4+CD304+调节性T细胞分选试剂盒分离无磁珠标记的小鼠CD4+CD304+天然调节性T细胞和应答T细胞的操作流程

图2 EasySep™ Release小鼠CD4+CD304+调节性T细胞分选试剂盒可分离出高纯度的CD4+CD304+细胞，这些细胞可高表达Treg标志物FOXP3和CD25

(A) 起始样本为naïve小鼠脾细胞，分选后的CD4+CD304+ T细胞通常为90.4 ± 3.0%，CD4+CD304+CD25hiFOXP3+细胞为71.0 ± 4.6%（平均值±标准差；使用“Big Easy”EasySep™磁极）。在上述示例中，起始样本和最终分选后的CD4+CD304+细胞纯度分别为3.0%和90.2%；CD4+CD304+CD25hiFOXP3+细胞为1.9%和73.0%。(B) 起始样本为naïve小鼠淋巴结，分选后的CD4+CD304+ T细胞通常为92.1 ± 0.7%，CD4+CD304+CD25hiFOXP3+细胞为78.1 ± 1.4%（平均值±标准差；使用“Big Easy”EasySep™磁极）。在上述示例中，CD4+CD304+细胞的起始和最终分选后的纯度分别为5.4%和92.3%；CD4+CD304+CD25hiFOXP3+细胞分别为4.0%和77.1%。(C) 起始样本为naïve小鼠脾细胞，分选后的CD4+CD304-应答T细胞通常为94.1 ± 2.9%，CD4+CD304-CD25-FOXP3-细胞为90.6 ± 3.0%（平均值±标准差；使用“Big Easy”EasySep™磁极）。

在上述示例中，CD4+CD304-细胞的起始和最终分选后的纯度分别为11.9%和95.4%；CD4+CD304-CD25-FOXP3-细胞分别为11.4%和94.4%。