35mm玻底培养皿

细胞转染实验

灯 废液缸 血球计数板 涡旋振荡器 恒温水浴箱 台式离心机 35mm培养皿 转染管 15ml离心管 观察用倒置显微镜 荧光显微镜和CCD 四、 实验步骤 1、细胞传代 （1） 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。 （2） 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。 （3） 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟（37℃，5%CO2 ）。用手轻拍培养瓶壁，观察

转染

管中，1000rpm离心5min。 (7) 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。 (8) 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 (9) 将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。 细胞转染 1）转染试剂的准备   A. 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。   B.震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡，。 2） 选择合适的混合比例（1：1－

磷酸钙法转染HEK293T细胞

过程： 1. 铺细胞： 选择状态良好的293T细胞传代， 2-3x105个细胞/35mm dish。 2. 20-24h后，待细胞长至铺满瓶底约50-70%的时候，进行转染。下面就35mm dish为例，采用以下转染体系： ddw： 105ul plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul， 即用4ul） 2M CaCl2： 16.5ul 2XHBS： 125ul 按上述顺序，往eppendorf管中依次加入上述四种试剂。 先将前三者混匀， 最后加2XHBS。 一种