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99
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Invitrogen
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100mL
Gibco™ HEPES(N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸)是一种两性离子有机化学缓冲剂,常用于细胞培养基中。当需要在 CO2 培养箱外长时间处理细胞培养物时,添加 10–25 mM HEPES 可提供额外的缓冲能力。HEPES 具有膜不透性、对生化反应的影响有限、化学和酶学稳定性、极低的可见光和紫外光吸光度等优点,因此是许多细胞培养系统的良好缓冲选择。
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文献和实验色。HEPES有些昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒。 原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。HEPES使用方法有两种:(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH至7.2,滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L
试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。 关于HEPES 缓冲溶液的配制,不同的文献资料有不同的说法。根据用途,一种是单纯的HEPES+NaOH,另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下: 一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制 119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES
液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH至7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L. (2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L),使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液,最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存.
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