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布氏锥尾线虫PCR阳性对照质粒

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  • 2025年07月11日
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    • 供应商

      上海圻明生物

    • 规格

      2μg

    布氏锥尾线虫PCR阳性对照质粒上海圻明生物优势供应。更多产品资料欢迎免费咨询。

    One of the many important uses of PCR technology is that it can be used to label DNA probes with high specific activity. PCR technology has high specificity, and can synthesize probe DNA fragments in quantities within 1~2h if [α-32P]dNTP or other markers are added to the substrate
    dNTPs, the probe DNA can be well labeled during DNA synthesis, and the incorporation rate of the marker can be as high as 70%~80%. Therefore, PCR labeling technology is particularly suitable for large-scale detection and non-radiolabeling. The disadvantage of this method is that a specific pair of PCR primers is synthesized.
    Labeling can also be achieved by using small fragments prepared from probe DNA as primers.

    Solution preparation

    1. Prepare a stock solution

    Unless otherwise stated, all unused stock solutions should be divided into disposable aliquots and stored at -20 °C after preparation. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
    1.1* Acid Stock Solution (125X):
    Add 20 μL DMSO to *ate (component B) to make a 125X* acid stock solution. 

    2. Prepare standard solutions

    *Salt standard solution
    Add 50 μL of 1 mM KH2PO4 (Component C) to 950 μL of deionized water or enzyme reaction buffer to give a 50 μM * saline standard solution (PS7). A 50 μM * saline standard solution (PS7) was taken and serially diluted 1:2 to obtain a serially diluted phosphate standard with deionized water or enzyme reaction buffer.

    3. Prepare a working solution

    Add 20 μL of 125X* stock solution to 2.5 mL of sterile H2O and mix well to make a working solution of *salt. Avoid potential Pi contamination. Note: Avoid direct exposure of *salts (component B) to light. Due to the high sensitivity of this assay to Pi, it is extremely important to use Pi-free labware and reagents.

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    相关实验
    • PCR专题

      PCR 反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR 阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳 性对照,其含量宜低不宜高(100 个拷贝以下)。但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳 性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大。因而当某一PCR 试剂经自己使用稳 定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照。 2、阴性对照:每次PCR 实验务必做阴性对照。它包括①标本

    • PCR技术综述

      过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区; 8、重复实验,验证结果,慎下结论。 二、 追踪污染源 如果不慎发生污染情况,应从下面几条出发,逐一分析,排除污染。 (一)设立阴阳性对照:有利于监测反应体系各成分的污染情况。选择阳性对照时,应选择扩增弱,且重复性好的样品,因强阳性对照可产生大量不必要的扩增序列,反而可能成为潜在的污染源。如果以含靶序列的重组质粒为对照,100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增。阴性对照的选择亦要慎重,因为PCR敏感性极高

    • PCR污染原因与检测方法

      :在分子生物学实验室及某些用克隆质粒阳性对照的检验室,这个问题也比较常见。因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力。其污染可能性也很大。污染的监测一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。对照试验一、阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要

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