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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温
- 保质期:
见标签
- 供应商:
Gibco
- 规格:
100mL
TrypLE™ Express 是一种非动物源性重组酶,适用于解离各种贴壁哺乳动物细胞,包括 CHO、HEK 293、A529、原代人角质化细胞和胚胎干细胞。TrypLE™ Express 裂解赖氨酸和精氨酸 C-末端上的肽键,可直接替代胰蛋白酶。其纯度提高了特异性,减少了一些胰蛋白酶提取物中存在的其他酶对细胞可能造成的损害。针对广泛的细胞培养应用提供了多种 TrypLE™ 配方。与胰蛋白酶和其他解离试剂相比,TrypLE™ Express 具有以下特点:
•对细胞作用温和
•在室温下保持稳定
•易于使用
•非动物来源 (AOF)
TrypLE™ Express 的改良方式如下:
包含不含
•EDTA• 酚红
可提供 TrypLE™ 溶液的配方,但对酶浓度保密。
对细胞作用温和
TrypLE™ Express 的纯度提高了特异性,其原因在于只有一种酶发挥作用。这减少了胰蛋白酶和其他提取物中由于多种酶切割造成的损害。
在室温下保持稳定
TrypLE™ Express 在室温或 2–8°C 下可保持稳定 24 个月,因此易于储存和处理、方便快捷。
易于使用
TrypLE™ Express 在现有方案中可直接替代胰蛋白酶。此外,单用稀释剂即可使 TrypLE™ Express 失活,无需使用胰蛋白酶抑制剂(如 FBS)。
非动物来源 (AOF)
与猪胰蛋白酶不同,TrypLE™ Express 不含动物来源成分。
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文献和实验separating buffer with 13.0 mL of water, 10.5 mL of acrylamide/bis solution, 100 μL of ammonium persulfate solution, and 20 μL of TEMED. Pour the separating gel,and overlay with water-saturated isobutanol. 3. Pour off the isobutanol and rinse
0.1%(w/v)的明胶,室温静置 15min 至明胶凝固。 2、在明胶上接种丝裂霉素处理过的 MEFs 细胞悬浮液,细胞数约为 1.8×106个。放置在 7℃,5%CO2 的培养箱中培养至细胞汇合度 70-80% 时进行传代。 3、吸去 MEFs 培养基,将 ESCs 接种于明胶上,添加 10ml ESCs 培养基,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中培养 3-5 天。 4、向 hESCs 中加入 1ml TrypLE Express,并将培养皿放置在 37℃ 条件下进行解离,直到所有的细胞都以小细胞
(依此类推)。 15、将收集的类器官转移到 5 ml Eppendorf 管中并放在冰上,4℃ 条件下 220g 离心 5min。 16、去除离心上清,并添加 37℃ 预热的 TrypLE Express(含 10μM Y27632)。轻轻旋转 Eppendorf 管,使类器官与 TrypLEExpress 混合均匀。 17、37℃ 条件下将类器官与 TrypLE 孵育 10min(致密型类器官)或 5min(低粘性和囊性类器官)。 18、加入 500μl 预冷的 DMEM/F12 终止消化,4℃
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