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- 2025年07月16日
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99
- 供应商：
上海普时如生物科技有限公司
- 规格：
2OD HPLC
一、定义
FAM标记阴性对照siRNA，即使用荧光素衍生物FAM（5'-羧基荧光素，最大激发波长=494nm，最大发射波长=520nm）对siRNA进行标记的阴性对照品。这种标记使得siRNA在特定波长的光激发下能够发出高强度荧光，从而便于实验观察和检测。
二、用途
- 监测转染效率：
- FAM标记的阴性对照siRNA可以通过荧光显微镜或流式细胞仪轻松监测siRNA在细胞中的摄取和转染效率。当发现细胞核有荧光定位时，通常说明转染效率较高。这对于评估转染方法的有效性和优化实验条件具有重要意义。
- 验证实验体系：
- 在RNAi（RNA干扰）实验中，使用FAM标记阴性对照siRNA可以验证实验体系和方法是否可靠。通过比较标记siRNA与未标记siRNA的转染效果，可以评估实验条件的稳定性和一致性。
- 评估siRNA的稳定性：
- 荧光标记还可以用于研究siRNA在细胞内的稳定性和代谢途径。通过观察荧光信号的强度和持续时间，可以了解siRNA在细胞内的半衰期和稳定性特征。
- 辅助研究siRNA的亚细胞定位：
- FAM标记的阴性对照siRNA有助于研究siRNA在细胞内的具体定位情况，这对于理解siRNA的作用机制和优化实验设计具有重要价值。
三、应用注意事项
- 在使用FAM标记阴性对照siRNA时，应确保实验条件的一致性和稳定性，以避免实验结果的偏差。
- 荧光信号的强度和分布可能受到多种因素的影响，如细胞类型、转染方法、siRNA浓度等。因此，在进行实验时应充分考虑这些因素，并进行适当的优化和调整。
- FAM标记的siRNA仅作为实验中的对照品使用，不应直接用于目标基因的沉默或激活等实验目的。
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文献和实验【求助】miRNA mimic用FAM标记后，转染细胞，荧光显微镜下观察
FAM标记容易淬灭 ，推荐使用cy3,cy5标记的mimic，你方便留个联系方式吗？我有个荧光标记RNA oligo（即siRNA/miRNA mimic)使用说明的技术文档,给你发一下。 batton 我一般转染48小时观察的@ouyi2738 lvhen520 aaron古 wrote: FAM标记容易淬灭 ，推荐使用cy3,cy5标记的mimic，你方便留个联系方式吗？我有个荧光标记
siRNA实验从入门到精通：合成与转染的那些“坑”你踩过吗？
的RNAi实验，离不开合理的对照设置： 通用阴性对照（NC）： 通用阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和目的基因mRNA序列没有明显的同源性；阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因也没有同源性。 荧光标记通用阴性对照（Fam-NC）： 荧光标记阴性对照与通用阴性对照的序列是相同的，通过标记荧光，方便在荧光显微镜下直接观察转染情况，可用于优化转染条件和评价转染效率。 阳性对照（GAPDH或者actin）： 阳性对照作为一个实验系统检查是很重要的。可以利用阳性对照来确认RNAi实验中转
于您的试验靶标 siRNA。） 转染 48 小时后，测量对照蛋白或 mRNA 水平相对于未转染细胞的减少量。太多的 siRNA能导致细胞毒性和死亡。赛默飞提供适用于各种靶标基因的阳性对照 siRNA。 9.使用阴性对照 siRNA 来区分非特异性效应 通过打乱最活跃的 siRNA 碱基序列排列，可以设计一个适当的阴性对照。一定要做好同源性搜索，以确保它与正在研究的生物体基因组缺乏同源性。 10. 使用标记的 siRNA 来进行试验方案优化 荧光标记的 siRNA 可用于分析 siRNA 的稳定性和转染
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