1.0ml深孔方口板，非灭菌，袋装

最全面的MTT大汇总

）。每板设对照（加100(储存液100 1640）。2）置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。3）每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）4）离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准

人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南

(SCM075) 添加到 7-10 mL 人 ES/iPS 细胞扩增培养基 (SCM130) 中，最终浓度为 10μM。 2. 用 ECM 凝胶 (CC131) 涂层 6 孔板。 3. 吸出培养基。用 2 mL 的 DMEM/F12 或 1X PBS 清洗孔。吸出 1 mL Accumax™ 溶液 (A7089) 并将其添加到孔中。在 37°C下孵育 5-6 分钟。手掌敲击板，以帮助解离细胞。 4. 向孔中加入 1 mL 单细胞传代培养基（来自步骤 1）。用 5 mL 移液器上下吹打 1-3 次以分离

ELISPOT标准操作程序（protocol）

对照孔。 4、刺激物：特异性刺激物和非特异性刺激物之分。 5、正对照孔加入10μL PHA，终浓度1-4ug/mL，该浓度能有效刺激IFN-γ的分泌。 6、加入实验者自己的刺激物（用Lympho-Spot™无血清培养基配制成10×终浓度，10μL/well）到实验孔。加完刺激物后不要再拍击ELISPOT板。有人认为拍击板子会让刺激物在孔中混合均匀。实际上，通过扩散，刺激物会很快混合均匀。拍击板子会让细胞聚集分布在孔的外周。 7、加完所有的样品之后，盖上板盖，放入二氧化碳培养箱，37°C培养18-24