真空过滤系统，250ml，0.45umCA（醋酸纤维）膜，9

CDNA文库筛选

摇床上。 11． 将 25 张滤膜转移到一个装有 50ml 杂交液（ 5 × SSPE ； 1 × Denhardt’s 液； 100 μ g/ml cT-DNA ； 0.1 ％ SDS ）的贮存罐内（直径至少 90mm ）， 68 ℃预杂交 2h 。 12． 对于每 ml 杂交液， 2 倍的 105 至 1 × 106 cpm 的双链探针经沸水浴变性 10min 后，迅速放冰上冷却。 13． 变性探针立即加到预杂交混合液中。 14． 在封口的贮存罐内于 68 ℃

组织培养时各种灭菌特点

值高于5.5，则维生素B1会被迅速降解。泛酸钙、植物组织提取物等要过滤灭菌，不能高温灭菌，否则会失去作用。防细菌滤膜的网孔的直径为0.45微米以下，当溶液通过滤液后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻，在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出的溶液就是无菌溶液。 过滤除菌操作步骤：首先将过滤器、接液瓶用纸包好，滤膜可放在培养皿内用纸包好。使用前先经121℃高压蒸汽灭菌

分子生物学常用实验技术（page 2)

节操作步骤 一、连接反应 1、取新的经灭菌处理的0.5ml eppendorf 管, 编号。 2、将0.1μg 载体DNA 转移到无菌离心管中，加等摩尔量(可稍多)的外源DNA 片段。 3、加蒸馏水至体积为8μl,于45℃保温5 分钟,以使重新退火的粘端解链。将混和物冷却至0℃。 4、加入10×T4 DNA ligase buffer 1μl, T4 DNA ligase 0.5μl, 混匀后用微量离心机将液体全部甩到管底,于16℃保温8-24 小时。 同时做二组对照反应，其中对照