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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2-8度
- 保质期:
24个月
- 英文名:
Biotin-PEG-SVA, MW 20,000 - 500 mg
- 库存:
100
- 供应商:
Laysan Bio
- 规格:
500mg
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文献和实验值比率( 495/280 或 550/280 ),选取适当组分合并。 生物素标记抗体 抗体标记中生物素的引入使整个过程灵敏度大大提高!这种方法可使抗体或其它蛋白质的ε-氨基与酰化的生物素共价结合,生物素化的分子可以通过酶标记的抗生物素蛋白或荧光染料-链霉抗生物素蛋白复合物来检测。小分子水溶性生物素对链霉亲和素的高亲和力是该方法的设计基础。 操作步骤 1.用无水 DMSO 配制 10mg/ml 生物素 N- 羟基琥珀酰亚胺酯溶液。 2.硼酸盐缓冲液(0.1mol/L, pH8.8
HABA/Avidin”。 3. 吸取100 ul 生物素标记的蛋白于杯中并测定500 nm 的吸光度值,记为A500 HABA/Avidin/Biotin (数值必须恒定15s 以上)如果A500 HABA/Avidin/Biotin的值不超过(≤)0.3,重新稀释待测样品并检测。 注:计算结果时必须考虑稀释度。 4. 计算Biotin/Protein摩尔比 ①A=生物素化的蛋白毫摩尔浓度=蛋白浓度(mg/ml)/蛋白的分子量 ②B=500nm处的吸光度变化 △
l 1 mg/ml 的细胞裂解物,加入一抗。在 4 °C 转子上孵育过夜。2. 加入蛋白 A 或 G 琼脂糖微球(10 - 30 μl 50% 微球浆)。4 °C 转子上孵育 1 - 3 个小时。3. 4 °C 离心 30 秒。沉淀用 500 μl 1 X 细胞裂解液洗五次。每次洗好后都置于冰上。4. 取沉淀进行 Western 免疫印迹分析或是激酶活性分析。使用生物素标记的一抗1. 14,000 X g 离心 1 分钟。取 200 μl 1 mg/ml 的细胞裂解物,加入生物素标记的一抗
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