培养瓶，25cm2，透气盖，CellBIND表面，灭菌，20

各类细胞培养小结

以洗去细胞表面的酶，悬浮细胞并计数，台盼蓝染色检测细胞活力为90％。将细胞以2×105/ml接种于25cm2培养瓶内，置于37 ℃恒温, 5%CO2 浓度,饱和湿度培养箱内培养。2天后换液1次，以后隔天更换培养液，倒置显微镜观察、照相记录细胞形态及贴壁生长情况。待细胞贴壁达到85%－90%后传代。 软骨细胞的传代培养 待细胞贴满壁后传代。传代时,吸干培养液,用PBS液轻洗细胞2次，培养皿内加入0.25%胰蛋白酶－0.01%EDTA（1比1）消化液,以覆满瓶底为限,置温箱2～3 min 后,显微

细胞培养技术扫盲——入门必知篇

、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替。 （2）培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位，规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种。用于外周血培养的常用10ml普通圆瓶。两种培养瓶均要求选用优质玻璃制成。 （3）培养皿：用于开放式培养及其它用途。分直径30mm、60mm、120mm等几种。 （4）吸管：常用的有长吸管和短吸管两类

原位杂交组织化学实验技术

应用 　　（一）光敏生物素标记cRNA探针的应用 　　以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针，使其最终浓度为0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦卤素灯下，距离光源20cm处照射30min。用仲丁醇抽提游离生物素，再用丁醇沉淀回收光敏生物素cRNA探针，将其溶于适量的灭菌双蒸水，用紫外分光光度计测探针的光密度（详第十九章　），其最佳工作浓度为2μg/ml。 　　切片的制作、预处理、预杂交、杂交和杂交后冲洗