SPIN-X离心浓缩管 500ul处理量 30K截留分子量

Northern blotting实验方案

低盐缓冲液洗脱，否则RNA会被洗脱。在胶中不能加EB，因为它会影响RNA与硝酸纤维素膜的结合。为测定片段大小，可在同一块胶上加分子量标记物一同电泳，之后将标记物切下、上色、照像，样品胶则进行Northern转印。琼脂糖凝胶中分离功能完整的mRNA时，甲基氢氧化银是一种强力、可逆变性剂，但是有毒，因而许多人喜用甲醛作为变性剂。所有操作均应避免RNase的污染。 2仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡

cDNA文库组标准流程

化钠 20g    蛋白提取物 10g    酵母提取物 加入蒸馏水至1升，用NaOH调pH值至7.0，高压灭菌。 2 x LB－甘油（12.5%）（200ml） 175ml  2 x LB液体 25ml   甘油（100％） 加入蒸馏水至200ml，压灭菌，置于4℃备用。 二、步骤 1.将cDNA文库转入大肠杆菌，如DH5a(DH10B)后，取少量菌液涂布氨苄平板，以推算克隆总量。 2.取一大小合适的三角瓶，根据克隆总量配制2 x LB液体，每500ml 2 x LB液体可扩增5x

Northern Blot实验方法

， dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，双氧水, 灭菌水等。 [方法与步骤] 1. 用具的准备： 180度烤器皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。 电泳槽：清洗梳子和电泳槽，并用双氧水浸泡过夜，用DEPC水冲洗，干燥备用。 处理DEPC水(2 L)备用。 2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染