兔 anti-E-Tag 多克隆抗体, HRP 偶联

多克隆抗体制备

1. 免疫动物：两只新西兰兔2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。3. 免疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。4. 免疫：用生理盐水稀释免疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后大腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/4的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。5. 取血：用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血清。6. 时间：第1星期 采血

多克隆抗体制备流程

抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。一般而言，抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体 ，由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体 ， 本篇主要讲述兔源性多克隆抗体制备的相关流程。抗原有两个基本特性，即抗原性和免疫原性。有抗原性的物质不一定有免疫原性，所以由此引出半抗原和完全全抗原，半抗原必须经过经过一定的改造（偶联蛋白载体

多克隆抗体的制备方法

（1）缓冲体系。纯化后的抗体必须处于一个相对接近体液的缓冲体系中，一般的PBS体系就足够了。注意不要引入高浓度的离子，尤其是金属离子。不要引入干扰抗体实验的离子或基团。 （2）防腐剂。为了防止抗体长菌，必须加入防腐剂，常见的防腐剂有：叠氮钠、硫柳汞、抗生素（庆大霉素）。叠氮钠的常用浓度是0.02%，硫柳汞和庆大霉素的常用浓度为0.01%，其中叠氮钠会抑制HRP酶活性，因此在需要偶联HRP酶的抗体中不能加这种防腐剂，而且叠氮钠会影响细胞色素氧化酶活性，会干扰机体的呼吸作用，因此操作时需要注意