延胡索酸酶活性检测试剂盒(WST-8法)

碧云天研发的延胡索酸酶活性检测试剂盒(WST-8法) (Fumarase Activity Assay Kit with WST-8, Fumarase Assay Kit with WST-8, Fumarate Hydratase Assay Kit with WST-8 or FH Assay Kit with WST-8)，是一种基于WST-8显色反应，通过比色法，快速、高灵敏地对细胞、组织或血液等组织样品中延胡索酸酶活性进行检测的试剂盒。

延胡索酸酶(Fumarase), 又称反丁烯二酸酶, 其正式名称为延胡索酸水化酶(Fumarate hydratase, FH)，是催化延胡索酸(Fumarate)和L-苹果酸(L-Malate)之间的可逆水合反应的酶，广泛存在于动植物和微生物中。延胡索酸酶有线粒体和细胞质两种形式，线粒体形式是三羧酸循环(Tricarboxylic acid cycle, TCA cycle)的关键酶之一，在TCA中的功能是促进以NADH形式产生能量的过渡步骤[1]，细胞质形式则在氨基酸和延胡索酸的代谢中起着重要作用。延胡索酸酶在胎儿和成人组织中普遍存在，在皮肤、甲状旁腺、淋巴和结肠中表达水平较高。延胡索酸酶的产生和发展中的突变导致在人类中发现了几种延胡索酸酶相关疾病，包括子宫的良性间叶质肿瘤、平滑肌瘤病和肾细胞癌，以及延胡索酸酶缺乏症。人延胡索酸酶缺乏导致严重的健康问题，如胎儿大脑异常，低张力和肾细胞癌等[2]。因此，准确测定延胡索酶活性对了解相关代谢状况以及对延胡索酶缺乏症等的预防、诊断和机理研究等都具有重要意义。

本试剂盒的检测原理如图1所示。延胡索酸酶将延胡索酸转化生成L-苹果酸，生成的L-苹果酸在苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase, MDH)的作用下氧化生成草酰乙酸(Oxalacetic acid, OAA)，在这一反应过程中NAD+被还原为NADH；生成的NADH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium methyl sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的Formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的Formazan与样品中延胡索酸酶的活性成正比。

图1.碧云天延胡索酸酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0520)检测原理图。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒在样品体积为20µl时可以检测浓度低至13µU的延胡索酸酶，在0.67-33.3U/L活力范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了延胡索酸酶的作用产物NADH的标准溶液，可以通过设置标准曲线(图2)，从而计算出样品中延胡索酶活力。

图2.碧云天延胡索酸酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0520)对NADH的标准曲线、阳性对照、小鼠肝脏和心脏样品的检测效果。左图为本试剂盒对标准品NADH的检测效果，反应时间为30分钟，在20-1000μM浓度范围内有良好的线性关系；右图为阳性对照(Positive control)、16μg蛋白量小鼠肝脏裂解样品(Mouse liver)和10μg蛋白量小鼠心脏裂解样品(Mouse heart)在反应30分钟内的吸光度变化图。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。

本试剂盒使用灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、尿液等生物体液，细胞培养上清及组织或细胞样品等的检测，全程约0.5-1小时即可完成。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

按照使用说明操作，用于96孔板检测时，本试剂盒小包装可以进行100次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
S0520S-1	BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay	20ml
S0520S-2	延胡索酸酶检测缓冲液	20ml
S0520S-3	酶溶液	200μl
S0520S-4	阳性对照(100X)	20μl
S0520S-5	显色液	200μl
S0520S-6	底物	200μl
S0520S-7	NADH	5mg
－	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。其中显色液、底物和NADH须避光保存。NADH配制成溶液后，须适当分装后-80ºC保存。

注意事项：

BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay、延胡索酸酶检测缓冲液(后续简称检测缓冲液)、显色液和底物需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。其它试剂在使用时应在冰上进行。

底物从-20ºC拿出在融解过程中可能会有析出，平衡至室温后析出的部分会复溶，不会对检测结果产生影响。

血清等样品如在4ºC保存，保存时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜-20ºC保存，-80ºC保存更佳。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。