裸鼠脑胶质瘤原位移植模型

（一）目的：

建立实验室动物建模的标准操作规程。

（二）适用范围：

本SOP适应于科沿有道实验室动物实验所有工作人员。

（三）主体内容：

胶质瘤是脑内最常见、浸润性最强的一种原发性脑肿瘤，因其恶性程度较高，患者存活期很短，临床治疗效果差，病死率很高在很大程度上威胁着人类的健康。而且，近年来其发病率有逐年上升的趋势。提高其早期诊断准确率及寻找新的治疗方案是目前研究的热点问题。针对胶质瘤研究首要的一点是建立准确可靠的胶质瘤模型。脑原位移植瘤模型形成的胶质瘤生物学性质与人类更接近，是一种理想的研究脑胶质瘤的生物学行为和治疗方法的实验工具，但不如皮下移植瘤易于观察。

1.实验动物：

品系：Balb/C-nu裸鼠；

性别：雌雄不限；

周龄：6-8周；

体重：18-20g。

2.操作流程：

1）动物适应性饲养7天；

2）手术前将房间进行紫外线照射消毒，手术物品提前高压灭菌后放入超净工作台，将手术需要的物品及调试好的立体定位仪，一起放入超净工作台，手术前打开超净工作台的紫外灯照射15min进行消毒。

3）手术前一天，将裸鼠禁食，手术当天，裸鼠称重麻醉后，放在保温垫上，头部固定于立体定位仪上，用碘伏对头部进行消毒后，按照矢状中线位置纵向切开皮肤，切口长度约1cm，根据立体定位仪解剖图谱确定对应于右侧尾状核的位置: 前囟点前1.0mm，中线右1.0 mm，深度为硬膜下3.0 mm，以颅骨钻钻孔，勿损伤硬脑膜。使用10μL 微量注射器吸入5μL 含1×10^5LN229-Luc 细胞悬液，注射细胞悬液3 min，留针2 min，钻孔用人工石蜡封闭，用5号线缝合，切口涂红霉素软膏以防术后感染。

4）术后护理：裸鼠苏醒后放入新更换的IVC鼠盒，并给予适当保温，每天观察小鼠状态，碘伏擦拭伤口，连续3d，整个过程动作轻柔，保证充足的饮水和饲料。

3. 实验结果鉴定：

1）小动物活体成像观察荷瘤小鼠腹腔注射荧光素底物( 150 mg/kg ) ，异氟烷麻醉5min 后，放入小动物活体成像系统进行检测。裸鼠于脑内接种后Day14、Day21、Day28、Day35、Day42 进行小动物活体成像检查，监测脑内原位接种肿瘤生长情况。

2）病理形态学观察：裸鼠于术后第42 天活体成像监测后进行anlesi，解剖取出整个脑组织于福尔马林中固定，HE 染色后，进行组织病理学检查，观察肿瘤组织细胞形态及生长情况。