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Human MCP-3(CCL7) ELISA

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  • ¥1560
  • BioTNT
  • 8.33-25pg/ml
  • 8.33pg/mL
  • 上海
  • A1010A0143
  • 2025年07月10日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 灵敏度

      8.33pg/mL

    • 库存

      99

    • 供应商

      上海普时如生物科技有限公司

    • 检测范围

      8.33-25pg/ml

    • 检测方法

      酶联免疫吸附测定

    • 应用

      仅供科研实验使用,严禁用于临床或其他非科研用途。

    • 适应物种

      human(人)

    • 标记物

      辣根过氧化物酶(HRP)

    • 样本

      血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清

    • 规格

      96wells

    Human MCP-3(CCL7) ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是用于检测人单核细胞趋化蛋白3(MCP-3,也称为CCL7)的一种科研工具。以下是关于Human MCP-3(CCL7) ELISA试剂盒的详细介绍:

    一、产品特点与用途

    • 特点:重复性好、灵敏性高、特异性强,适用于科学研究。
    • 用途:仅供科研使用,不得用于临床诊断。可用于检测人血清、血浆、组织匀浆等样本中的MCP-3含量。

    二、检测原理

    Human MCP-3(CCL7) ELISA试剂盒的检测原理基于酶联免疫吸附技术。其基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,滴加底物溶液后,底物在酶的作用下发生颜色反应。颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比,从而可以判定样本中MCP-3的含量。

    三、实验流程

    1. 实验前准备:将所有试剂和样本置于室温平衡,按照说明书要求准备标准品、试剂及样本。
    2. 加样:向酶标板各孔中加入标准品或待测样本,孵育一定时间。
    3. 加检测溶液:加入检测溶液A,再次孵育。
    4. 洗板:洗涤去除未结合的成分。
    5. 加检测溶液B:加入检测溶液B,继续孵育。
    6. 显色:加入TMB底物溶液,在酶的催化下发生显色反应。
    7. 终止反应:加入终止液终止显色反应。
    8. 读数:在特定波长(如450nm)下测定各孔的吸光度值(OD值),根据标准曲线计算样本中MCP-3的含量。

    四、保存与运输

    • 保存条件:试剂盒应置于2-8℃条件下避光保存,避免反复冻融。开封后的试剂和酶标包被板应密封并置于2-8℃保存。
    • 运输方式:一般采用快递运输,使用生物干冰或冰袋保持低温环境。
    五、产品说明书
    人单核细胞趋化蛋白3酶联免疫试剂盒
    Human MCP-3 ELISA Kit


    用于血清,血浆,细胞上清及其他生物体液中
    人单核细胞趋化蛋白3的检测
    货号:A1010A0143    
    96 tests
    仅供科研使用,勿用于药物、临床检测

    检测原理:
    本试剂盒采用双抗夹心法。用抗Human MCP-3抗体包被于酶标板上,标准品和样本中的Human MCP-3与单抗结合,加入生物素化的抗Human MCP-3,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液,在450nm处测OD值,Human MCP-3浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中Human MCP-3的浓度。

    试剂盒组份(2-8℃保存)
    1.    Human MCP-3 酶标板(coated wells),12*8wells(单孔可折),1 plate
    2.    Human MCP-3 标准品3.2 ngstandards),1vial
    3.    Human MCP-3 200×检测抗体 HRP 结合物 60μL1 vial
    4.    稀释液IAssay Diluent I),30 mL1 vial
    5.    稀释液 IIAssay Diluent II),12 mL1 vial
    6.    20×浓缩洗涤液(Wash Buffer),30 mL1 vial
    7.    显色液AColor Reagent A),6 mL1 vial
    8.    显色液BColor Reagent B),6 mL1 vial
    9.    终止液(Stop Solution),12 mL1 vial
    10.  封板膜,3张;

    未提供的试剂、仪器和耗材:
    1.    单道或多道(8道或12道)移液器及移液器枪头:10-200μL50-1000μL
    2.    多道(8道或12道)移液器试剂存放槽;
    3.    EP管及试剂配置容器;
    4.    圆柱形量筒:100mL200mL500mL1L
    5.    可在450nm处进行读数的酶标仪; 洗瓶或自动洗板机;
    6.    蒸馏水或去离子水;封板膜或板盖;乳胶手套;吸水纸;

    注意事项:
    1.  严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
    2.    洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
    3.    消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
    4.    底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
    5.    避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
    6.    在储存和温育时避免强光直接照射。
    7.    任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发出来的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反映试剂的生物活性。
    8.    标准孔及待测样本均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线,请合理安排预实验。
    9.    不能使用过期产品。

    样本与试剂准备:
    1.    样本:本试剂盒可检测血清,血浆(EDTA,肝素抗凝),细胞培养上清液,组织匀浆等生物学样本。样本储存要求2-8℃保存48小时以内,更长时间需冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。如样本Human MCP-3 含量过高,可用稀释液 I进行稀释。
    2.    标准品配制:将3.2ng标准品离心后,加入2000μL的稀释液 I配制成浓度为1600pg/mL的标准品溶液(标准曲线最高点),轻轻振荡混匀。;再准备六支EP管,分别加入500μL稀释液I,吸取1600pg/mL的标准品溶液500μL加入第一管中,充分混匀,从第一管中取500μL加到第二管中,充分混匀,如此反复对半稀释至浓度25pg/mL的标准品溶液;另取一空白EP管加入足量的稀释液I,设为空白对照。
    产品细节图片1
    3.    1×检测抗体 HRP 结合物:用稀释液 II1:200倍稀释200×检测抗体 HRP 结合物。
    4.    显色液配制:A液和B液做11配制,即配即用,可根据使用量临时配制(使用前15分钟内配制),不要配制过多的显色液。
    5.    1×洗涤液配制:用蒸馏水120倍稀释(示例:1mL 20×浓缩洗涤液加入19mL蒸馏水);

    操作步骤:
    样本,细胞上清,细胞裂解液,脑脊液,以及其他生物学样本均需要在正式实验前预实验确认稀释倍数;血清样本一般情况下建议按照50μL 上样。
    酶标板是12*8wellslockwell 形式,属于单孔可折形式,可以按照自己的需要每次拆下相应的板条来进行实验;如果第一次使用biotnt的这款试剂盒,建议您在进行大批量实验之前先进行预实验;
    预实验方式:选用1条酶标板,加入标准品1600pg/ml 25pg/ml0孔;另外,再选择您待测的两个样本,第一个样本选择三个稀释梯度;第二个样本选择两个稀释梯度来进行预实验;
    实验步骤:
    1.    加样:加入相对应标准品100μL,加入待测样品50μL、稀释液I  50ul(样本已经稀释2倍回归计算时需乘以稀释倍数2), 封板,充分混匀,室温温育60分钟;
    2.    洗板:用1×洗涤液将反应板充分洗涤3次,在吸水纸上拍干;
    3.    每孔加入已稀释1×检测抗体 HRP 结合物100μL,封板,室温温育60分钟;
    4.    洗板:同第二步;
    5.    每孔加入已配制的显色工作液100μL,将反应板置暗处室温5-15分钟,每隔一段时间,目测标准品和样本的板孔变为蓝色, 酶标仪620-630nm 进行读数并保存(第一次数据),标准品孔的最高点读数OD 值如果超过0.8,请及早终止。如果标准品最高点读数没有超过0.4,可以延长室温温育时间为30min,再进行下一步终止反应。
    6.    每孔加入100μL终止液,混匀;如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀,请轻轻叩击板框,充分混匀。
    7.    5分钟内进行酶标仪读数,设置双波读数(第二次数据),酶标仪主波长450nm,副波长620-630nm检测吸光度。校准后的OD 值为450 nm 的测定值减去 620-630 nm 的测定值。仅使用450 nm 测定会导致OD值偏高,并且准确度降低。
    8.    如果酶标仪没有620-630nm的波长,也可以根据酶标仪的情况选择570-650nm的波长作为替代。

    结果计算与判断:
    1.    所有OD值都应减除空白值后再计算;先计算450-630nm的数据(第二次数据);
    2.    以标准品1600, 800, 400, 200, 100, 50, 25, 0pg/mL为横坐标,450-630nmOD值为纵坐标,画出标准曲线。
    3.    根据样本OD值在该曲线图上查出相对应Human MCP-3含量,如样本有稀释,请再乘上稀释倍数。如果样本没有进行预稀释,则稀释倍数为2 。计算出的数值应该乘以2
    4.    推荐采用双对数方式进行数据拟合。如下是示例数据:
    Standard (pg/mL)O.D. (450 nm-630nm)MeanZero Standard Subtracted (Std.)-(S1)
    1600pg/ml2.198,2.2022.2002.136
    800pg/ml1.169,1.1731.1711.107
    400pg/ml0.641,0.6470.6440.580
    200pg/ml0.329,0.3320.3310.267
    100pg/ml0.177,0.180.1790.115
    50pg/ml0.113,0.1180.1160.052
    25pg/ml0.086,0.090.0880.024
    0pg/ml0.061,0.0660.0640.000
    产品细节图片2

    试剂盒数据批内差(Intra-Assay):
    选取不同浓度的血浆样本各3例在同一次验证实验中加样20孔,来验证批内差,检测结果如下:
    Sample123
    N202020
    Mean (pg/mL)54.07533.51067.38
    SD(pg/mL)3.2928.9227.97
    CV (%) 6.085.422.62

    试剂盒数据批间差(Inter-Assay):
    选取不同浓度的血浆样本各3例在10次不同的实验中进行检测,来验证批间差,检测结果如下:
    Sample123
    N101010
    Mean (pg/mL)55.72536.851068.58
    SD(pg/ml)4.1442.5754.28
    CV  (%)7.437.935.08

    试剂盒灵敏度(Sensitivity):
    本试剂盒检测Human MCP-3的最低浓度为8.33pg/mL,验证实验选取两条标准品进行梯度稀释确认8.33pg/mL以上浓度的反应孔OD值呈正相关线性分布,Human MCP-3浓度在8.33-25pg/ml之间样本可以被检测到但会有较大偏差,低于8.33pg/mL无法被检出。

    试剂盒数据回归性(Recovery):
    选取血清、血浆、细胞上清等不同类型的人样本按低浓度、中浓度、高浓度分组稀释做回归性验证实验,将线性回归后的浓度值与理论浓度值相比较统计结果如下:
    样本类型Average Recovery%范围%
    血清103101-105
    血浆10099-101
    细胞上清9995-103

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