细胞系鉴定技术服务简介

（一）技术简介：

基于细胞系被错误辨识和交叉污染等问题造成的大量研究经费的浪费和大量无效或错误数据的产生，细胞鉴定已经成为科研工作者备受关注的话题。

2007年NIH发布了通知，强烈建议在使用培养细胞的时候进行鉴定（authentication）。2011年初，美国菌种保藏中心（ATCC）制定了人源细胞系STR鉴定标准，旨在减少因细胞交叉污染和错误辨识所导致的无效科研数据。

细胞系鉴定(Cell Line Authentication)是指对广泛应用于科学研究和药物开发的模式细胞进行鉴定。

STR基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定。STR（Short Tandem Repeat，短串联重复序列）基因位点由长度为3～7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹。

STR基因座位上的等位基因可通过PCR扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，根据所得的STR分型结果与多个数据库的细胞系STR数据进行比对，从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。

科沿有道细胞系STR鉴定服务在ATCC检测的8个STR和1个性别决定位点外，另新增了10多个高度多态性位点。可提供人源细胞及小鼠细胞的鉴定服务，数据可靠，实验周期短。

（二）人源细胞STR鉴定：

用 Axygen 的基因组抽提试剂盒提取 DNA，采用21-STR扩增方案扩增，在ABI3730XL 型遗传分析仪上对STR 位点和性别基因 Amelogenin 进行检测。

采用 DSMZ tools 进行细胞系比对，其中包含来自于 ATCC,  DSMZ,  JCRB 和RIKEN 数据库的2455 个细胞系 STR 数据。如果待检测细胞未收录于以上细胞库或这是自行建立的新细胞系将无法进行比对，可根据细胞分型结果自行与其他数据库进行比对。

细胞STR分型基因扫描图谱示例：

（三）小鼠细胞STR鉴定：

依据美国国家标准技术研究所NIST  和ATCC 建议的9个四碱基重复位点：18-3、9-2、6-7、5-5、X-1、15-3、12-1、6-4、4-2和Jarid1，并额外添加人源位点CSF1PO和vWA，用于鉴定人鼠细胞交叉污染。

（四）技术优势：

准确率高：在ATCC检测的8个STR和1个性别决定位点基础上，另增加10多个高度多态性位点。

服务全：分型结果跟多个权威细胞数据库比对，不仅可以鉴定鉴定细胞系是否正确，还可以鉴定细胞系是否发生交叉污染。

周期短：拥有全套检测设备和专业实验平台，在最短的时间内为客户提供服务。

（五）实验流程：

细胞DNA提取→STR位点扩增→STR基因型结果分析→数据库序列对比→鉴定报告。

（六）样品要求：

1、需提供细胞或者基因组DNA，样本详细信息：如种属来源、样本类型等。

2、细胞样本：细胞数≥10^6个，收集细胞沉淀，管壁标记清楚细胞的名称（如293T）。

3、DNA样品：OD260/OD280在1.8~2.0之间，样品体积≥20μl，浓度≥50 ng/μl。

（七）交付内容：

1、检测结果的书面报告：细胞STR分型数据；是否存在多等位基因（交叉污染）；

2、STR分型的图谱。