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- TD-BK3201
- 2026年02月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
Bioyears
- 库存：
999
- 样本：
细胞,血液,组织,病毒
- 适应物种：
Human; Mouse;Rat
- 应用：
科研检测
- 检测方法：
ELISA
- 检测范围：
10ng/mL
- 规格：
96Test
β-Actin 酶联免疫检测试剂盒说明书
一、试剂盒简介
二、试剂盒组分
|
试剂盒组分 |
96孔板配置 |
保存 |
|---|---|---|
|
使用说明书 |
1份 |
|
|
酶标包被板 |
1×96孔 |
2-8℃保存 |
|
β-Actin标准品 |
100 uL×1管 |
-80℃保存 |
|
检测抗体 |
50 uL×1管 |
-80℃保存 |
|
HRP-羊抗鼠二抗 |
10 ul×1管 |
-80℃保存 |
|
TMB底物显色液 |
13 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
显色底物终止液 |
13 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
样品稀释液 |
13 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
抗体稀释液 |
13 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
洗涤液（10倍浓缩） |
30 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
三、保存
本试剂盒各组分按标签温度保存，有效期6个月。
四、所需仪器
酶标仪（波长450 nm），10 μL、100 μL、1 mL移液器，300 μl多道移液器，移液器吸头、37℃恒温水浴箱。
五、操作步骤
1、actin标准品溶液配制。取8个新EP管，分别标记1-8#。在1#管中加入990μL样品稀释液，2-8#管中分别加500μL样品稀释液。加入10μL标准品（100 ug/mL）到1#管中，剧烈振荡。从1#管中取出500μL加入2#管，剧烈振荡。同样方法完成3-8#管的稀释（1-8#管actin浓度分别是1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625 ng/mL）。稀释好的标准品建议在15min内使用。另外，标记一个新EP管为B0（maximum binding，0 ngmL），加入500μL 样品稀释液。
2、将浓缩洗涤液用蒸馏水做10倍稀释。配好的洗涤液可室温保存3个月（但不能超出试剂盒的保质期）。
3、取出包被有抗β-actin的96孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两孔，100 μL/孔加入酶标板中。加待检样品各两孔，100 μL/孔。37℃孵育1小时。用洗涤液洗涤三遍，拍干。
4、将检测抗体用抗体稀释液做1:500稀释，加入各反应孔，100 μL/孔（检测抗体用多少稀释多少，现用现配）。加样过程须在15 min内完成。置37℃孵育1小时，用洗涤液洗涤三遍，拍干。
5、将HRP-羊抗鼠二抗用抗体稀释液做1:5000稀释，加入各反应孔，100 μL/孔。置37℃孵育1小时，用洗涤液洗涤四遍，拍干。
6、用移液器加TMB底物显色液100 μL/孔，室温20–24℃避光反应10 min，请勿震荡。
7、用移液器加终止液50 μL/孔，稍微震荡5s混匀。
8、在酶标仪450 nm波长处读数。
六、注意事项
1、如样品中β-Actin含量高于1000 ng/mL，可将样品做适当稀释。
2、样品如为冻干制剂，应用样品稀释液充分溶解混匀。
3、反应时应将整板放入洁净的密闭空间中，为防止反应孔中落入异物。
4、洗涤拍干后，应消除各孔内残余的气泡。
5、开封后，将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中，置4℃密闭保存。
6、在操作过程中，所使用的移液器吸头、洗涤机（瓶）、器皿等均应严格避免被污染。
七、结果判定
1、实验有效参数。实验结果须满足以下有效参数为成立：
0 ng/ml OD值≤0.1； 1000 ng/ml OD值≥0.80； R2≥0.98；
2、计算。在EXCEL里面以标准浓度为横坐标，消零OD值为纵坐标作散点图，添加趋势线，再显示曲线方程和R2值，将检测样品OD值消零处理后带入直线方程计算对应的浓度。
|
标准浓度 |
OD1 |
OD2 |
平均值 |
消零OD |
|---|---|---|---|---|
|
1000 |
0.972 |
0.937 |
0.9545 |
0.8635 |
|
500 |
0.615 |
0.721 |
0.668 |
0.577 |
|
250 |
0.458 |
0.386 |
0.422 |
0.331 |
|
125 |
0.388 |
0.243 |
0.3155 |
0.2245 |
|
62.5 |
0.207 |
0.218 |
0.2125 |
0.1215 |
|
31.25 |
0.157 |
0.148 |
0.1525 |
0.0615 |
|
15.625 |
0.113 |
0.118 |
0.1155 |
0.0245 |
|
0 |
0.090 |
0.092 |
0.091 |
0 |
3、判定。在标准曲线中，设OD 0–500 ng/mL为区间A；OD 500–1000 ng/mL为区间B；大于OD 1000 ng/mL为区间C。
3.1 如测得的OD值小于标准曲线中15.625ng/mL对应OD值，则β-Actin含量测定结果计为小于15.625 ng/mL。
3.2 如不同稀释浓度的样本测得的OD值均位于区间A，则最终结果计算取其最低稀释度的测定值。
3.3 如不同稀释度的测定值均位于区间B或同时位于区间A和B或同时位于区间B和C，则取其最接近OD 500 ng/mL的测定值。
3.4 如不同稀释度测定值均位于区间C，则需将样本做进一步稀释测定，使其测定值居15.625 – 1000 ng/mL所对应的OD值区间，计算方法按上述3.2 – 4。
3.5 如高稀释度测得OD高于低稀释度或未稀释的样本OD，则可能是操作失误或样本中β-Actin含量过高（HOOK效应），需重试或调整稀释度。
3.6 最终结果要考虑稀释因素（β-Actin实际含量＝计算值×稀释倍数）。
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文献和实验小鼠β-肌动蛋白(β-actin)酶联免疫分析（ELISA）
小鼠β- 肌动蛋白 ( β -actin) 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中 β-肌动蛋白(β-actin) 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 小鼠β- 肌动蛋白 ( β -actin) 水平。用纯化的 小鼠β- 肌动蛋白 ( β -actin) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔
mnidr 我想做拟南芥基因和烟草基因的NORTHERN，想选择β-actin作为内参，请问，在拟南芥和烟草中β-actin的序列是一样的吗？如果在更远的物种里呢，比如动物？？？？ freecell 脊椎动物中不同物种的β-actin基因氨基酸之间的序列同源性超过98%。其它种属不清楚，你可以在NCBI里面blast一下。 sherwing2009 可以在NCBI中，blast一下，相似
Q1： 要做real-time pcr，而该种的β-actin未确定，我知道一般用持家基因作内参，但似乎其他基因各有缺点，有的作者用他们做内参时被SCI杂志要求用两个内参以证实，我想知道的是除了β-actin，哪个基因是SCI公认的内参基因(不用作两个内参了)? A1： 28S和18S rRNA 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 还有α-tublin,ubiquitin,GAPDH,histone Q2： 做相对定量real
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