Sino Biological RET重组蛋白(M918T,Human) 昆虫细胞表达 ret蛋白

重组蛋白在E.coli中表达及纯化

一. 实验目的1. 掌握重组蛋白诱导表达的方法。2. 亲和层析法纯化His 标记的融合蛋白。二. 实验原理将目的基因连接在表达载体后，通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外，在终止子前有6个His编码序列，便于蛋白的亲和层析纯化。亲和层析以蛋白质或生物大分子和结合在介质上的配基间的特异亲和力为基础。本实验采用磁座和结合有Ni2+的磁珠在变性或非变性条件下对融合蛋白进行分离纯化，只需通过“结合-清洗-洗脱”三个简单的操作步骤就可完成。该系统可根据样本量灵活

QIAgenes 预制蛋白表达载体

QIAgene Expression Kit——再也不为重组蛋白的表达效率发愁 据Protein Database的最新数据表明，目前已知的人类蛋白有35,000种(包括splice variants)，大约33%的蛋白正处于研究中，但是只有8%的蛋白能够成功表达。统计数据同时显示，目前克隆，表达，纯化的成功率只维持在54%，74%，59%。所以说，在蛋白表达的漫漫征途中，拿不到想要的蛋白是一件非常普遍的事情。举一个例子来说对于目标蛋白不表达或表达量低这个常见问题，需要排除或检查的因素就太多

【转帖】教你一种简单、高效的提高重组蛋白质的诱导表达量的方法

相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。记得小编在读书的时候就经常在研究这个问题，泡了无数论坛，看了无数帖子，尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间，甚至让别的公司帮忙做密码子优化（将目的片段通过全基因合成的方式合成出来）。总的来说，提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的，但一般也就用到1mM的浓度，再高对细胞有毒性； 培养基营养越丰富，表达量越高，所以如果追求表达量的话，就不要用LB培养基了，用自动诱导培养基吧； 诱导温度，温度越低表达